[发明专利]用于抑制TGF-β2表达的shRNA

说明书

技术领域

本发明涉及用于抑制TGF-β2表达的shRNA及包含该shRNA的抗肿瘤组合物。

背景技术

转化生长因子β2(TGF-β2)与转化生长因子β1(TGF-β1)相同，都是通过抑制细胞毒性T细胞、自然杀伤细胞以及巨噬细胞等的增殖及分化来阻碍对肿瘤的免疫监测，而且作为多功能分泌蛋白质，根据细胞类型(type)和时期，将起到抑制增殖、复制、侵袭、转移、细胞凋亡、免疫监测以及生成血管等多种作用，不仅如此，与TGF-β1一样，还能成为对信号通路的非活化或细胞周期内的非正常调节的起因，对抑制增殖的作用出现耐受性的肿瘤在发展的后期，TGF-β2反而起到促使肿瘤发展的作用。因此，克服人体免疫机制而进行增殖的肿瘤细胞分泌TGF-β2，从而能够逃逸人体免疫监测，同时成为增强对增殖和侵袭转移、以及血管生成的作用。TGF-β2与TGF-β1之间的显著差异性在于，TGF-β2会诱导Foxp3来显著地诱使抑制免疫，而且影响肿瘤的转移、新生血管的生成及增殖等，从而诱导肿瘤发展成为恶性肿瘤。

关于TGF-β2的在先研究有，如非专利文献1(Schlingensiepen et al,Transforming growth factor-beta2 gene silencing with trabedersen(AP 12009)in pancreatic cancer,Cancer Sci 102:1193-1200,2011.)，其中使用了对人TGF-β2的编码序列的18-mer硫代反义寡聚核苷酸(phosphothioate antisense oligonucleotide)合成，而且观察到肿瘤免疫抑制的解除、肿瘤尺寸的减小、向淋巴结的转移及血管形成的减少等，然而无法发挥效果。

在非专利文献2(Chenyu Zhang et al,Transforming growth factor-β2 is a molecular determinant for site-specific melanoma metastasis in the brain,Cancer Res.2009February 1；69(3):828-35.)中公开了，制备相对于鼠科动物的TGF-β2的shRNA TGCTGTTGACAGTGAGCGCGGTGTATAAATCGAGACCAAATTAGTGTGAAGCCAC AGATGTATTTGGTCTCGATTTATACACCTTGCCCCTACTGCCTCGGA(靶)，此外还制备能够产生TGF-β2 shRNA的慢病毒(lentivirus)，通过将慢病毒整合到染色体来消除肿瘤，然而消除癌症后其将继续转移至正常细胞内，从而副作用让人堪忧。

发明内容

技术问题

基于此，本发明人为解决上述问题经过努力研究结果，完成了本发明，即筛选能够有效地诱导人TGF-β2或小鼠TGF-β2沉默(silencing)的靶，从而制备shRNA，使之导入腺病毒(adenovirus)内，从而大幅改善根据现有非病毒性制剂的shRNA的转移能力。因此，本发明在于提供用于抑制TGF-β2表达的shRNA，其靶序列为SEQ ID NO：1或2所示的碱基序列。

进一步，本发明在于提供包含作为活性成分的所述shRNA的抗肿瘤组合物。

进一步，本发明在于提供用于表达shRNA的重组表达载体(vector)。

进一步，本发明在于提供包含作为活性成分的所述重组表达载体的抗肿瘤组合物。

进一步，本发明在于提供导入有所述重组表达载体的腺病毒。

技术方案

为解决上述问题，本发明提供用于抑制TGF-β2表达的shRNA，其靶序列为SEQ ID NO：1或2所示的碱基序列。

为解决上述问题，本发明在于进一步提供包含作为活性成分的所述shRNA的抗肿瘤组合物。

为解决上述问题，本发明在于进一步提供用于表达shRNA的重组表达载体。

为解决上述问题，本发明在于进一步提供包含作为活性成分的所述重组表达载体的抗肿瘤组合物。

为解决上述问题，本发明在于进一步提供导入有所述重组表达载体的腺病毒。

有益效果

本发明通过制备用于抑制TGF-β2表达的新型shRNA并使用作为基因转移体的腺病毒来提高感染率，从而与现有技术相比大幅提高特异性、转移能力及表达抑制能力。