[发明专利]用于调节血管生成和血管发生的方法和组合物

说明书

相关申请的交叉参考

本申请要求2012年1月27日提交的美国临时专利申请号61/591,486、2012年4月24日提交的美国临时专利申请号61/637,740和2012年10月4日提交的美国临时专利申请号61/709,619的利益；为了所有目的将所述美国临时专利申请的说明书和附图通过引用整体并入本文。

关于联邦政府资助的声明

不适用的。

领域

本公开内容在血管生成和血管发生的领域内；例如用于治疗缺血性事件例如中风。其也在干细胞和通过基因操作从干细胞衍生的细胞的领域内。

背景

在稳定的中风中，恢复血管流量是恢复脑的营养物供应所必需的。为了修复长期缺血后血管损伤，需要至少两个连续步骤。第一步骤是内皮细胞(EC)的芽生式血管生成；该过程必需内皮细胞的初始增殖和周围细胞外基质的重塑。VEGF-介导的EC的增殖和基质金属蛋白酶属于血管生成性萌芽的主要组成部分。第二步骤是血管稳定化，该过程依赖于血管平滑肌细胞的募集以包围新生成的血管。单核细胞和周细胞也参与血管稳定化，其产生适当的动脉生成因子(arteriogenic factor)和细胞外基质蛋白。在利用平滑肌细胞和周细胞的血管稳定化不存在的情况下，可发生新生血管的退化。

已显示骨髓基质细胞(MSC，也称为间充质干细胞))在脑动脉闭塞和创伤性脑损伤后促进血管再生(revascularization)(参见Omori等人(2008)Brain Res.1236:30-38；Onda等人(2008)J.Cereb.Blood Flow Metab.28:329-340；Pavlichenko等人(2008)Brain Res.1233:203-213；Xiong等人(2009)Brain Res.1263:183-191)。SB623细胞是通过用包含编码Notch细胞内结构域(NICD)的序列的载体转染骨髓基质细胞获得的骨髓基质细胞的衍生物(参见例如，美国专利号7,682,825和Dezawa等人(2004)J.Clin.Investig.13:1701-1710)。SB623细胞引发实验性中风模型中的功能改善(参见，例如，美国专利号8,092,792和Yasuhara等人(2009)Stem Cells and Development 18:1501-1514)。虽然SB623细胞的分泌蛋白质组与亲代MSC的分泌蛋白质组是相当的；但已观察到相较于SB623细胞，MSC分泌不同水平的特定营养因子(参见，例如，Tate等人(2010)Cell Transplantation 19:973-984；美国专利申请公布号2010/0266554。此外，已报导许多其表达水平在MSC与SB623细胞之间相异的因子参与血管再生。

因为中风是美国成人失能的首要原因，是世界范围内死亡的第二大原因，因此仍然存在治疗的需要以恢复对中风诱发的脑的缺血性损伤的区域的血液供应和促进该区域的再灌注。

概述

本发明人已发现利用编码Notch细胞内结构域的序列转染的间充质干细胞的后代(即，SB623细胞)具有令人惊讶的能够合成和分泌促进血管生成的因子的性质。因为血管生成即新血管的形成是在脑损伤和疾病中内源性修复过程的至关重要的部分，所以该发现提供了新的用于治疗血管障碍例如中风的方法。

因此，本公开内容除其它以外提供了：

1.一种用于增强受试者的血管生成的方法，所述方法包括给所述受试者施用SB623细胞的群体；其中所述SB623细胞通过如下步骤获得：(a)提供间充质干细胞的培养物，(b)将步骤(a)的细胞培养物与包含编码Notch细胞内结构域(NICD)的序列的多核苷酸接触，其中所述多核苷酸不编码全长Notch蛋白，(c)选择包含步骤(b)的多核苷酸的细胞，和(d)在选择不存在的情况下进一步培养步骤(c)的选择的细胞。

2.实施方案1的方法，其中血管生成的增强在中枢神经系统中发生。

3.实施方案2的方法，其中血管生成的增强在脑中发生。

4.一种用于修复受试者的缺血性损伤的方法，所述方法包括给所述受试者施用SB623细胞的群体；其中所述SB623细胞通过如下步骤获得：(a)提供间充质干细胞的培养物，(b)将步骤(a)的细胞培养物与包含编码Notch细胞内结构域(NICD)的序列的多核苷酸接触，其中所述多核苷酸不编码全长Notch蛋白，(c)选择包含步骤(b)的多核苷酸的细胞，和(d)在选择不存在的情况下进一步培养步骤(c)的选择的细胞。