[发明专利]赋予酵母对乙醇和高温的耐受性的基因

说明书

描述与了鉴定赋予酵母乙醇耐受性的基因的方法、赋予乙醇耐受性的基因、以及用于鉴定这些基因的突变株。此处特指为HpETT1的基因是从多形汉逊酵母中分离的。在特指为7E的乙醇敏感突变体多形汉逊酵母菌株中HpETT1的表达互补了该突变体的乙醇敏感性。当该HpETT1的多个拷贝被整合到该基因组中并过量表达时，被转化的菌株表现了大约10倍更大的对乙醇的耐受性和对蛋白错误折叠剂AZC的耐受性。HpETT1的表达还增加了酿酒酵母中的乙醇耐受性。HpEtt1与来自酿酒酵母表示为MPE1的一种先前鉴定的蛋白具有39％序列一致性，然而，该MPE1基因不会赋予对该7E突变体的乙醇耐受性。鉴定了另一种来自树干毕赤酵母的基因，该基因此处被指定为PsETT1，它编码一种与HpETT1具有37％一致性的直系同源蛋白，并且还赋予对该7E突变体的乙醇耐受性。

相关申请的交叉引用

本发明要求于2012年1月12日提交的美国临时申请号61/585,873和61/585,917的优先权。

技术领域

本披露涉及赋予用以通过发酵生产乙醇的酵母乙醇耐受性的基因，具体涉及多形汉逊酵母的木糖发酵菌株的增加的乙醇耐受性，涉及有用于鉴定乙醇耐受基因的多形汉逊酵母的乙醇敏感突变体，涉及多形汉逊酵母的乙醇耐受重组体，并且更具体地涉及此处分别指定为HpETT1和PsETT1的来自多形汉逊酵母和树干毕赤酵母的基因序列，HpETT1和PsETT1与酿酒酵母的MPE1基因在序列上相似但赋予酵母(包括多形汉逊酵母和酿酒酵母)增加的乙醇耐受性。

背景

在该背景部分和后面的说明中引用的参考文献是为了提供对下文所述的发明的更好的理解，作为材料和方法的来源(它们会进一步使人员能够实践这些方法和/或获得下文所述的组合物)，以及作为这类方法的缩略。因此，通过引用来结合此处引用的每个参考文献以达到这样的程度，这些参考文献为帮助制备和使用后面所要求保护的发明提供教导。如果在此处提供的披露和参考文献中有任何冲突，本披露将引用的参考文献的教导控制在它们冲突的程度内。此处任何参考文献的引用并非承认这样的文献与下文所要求保护的发明有关或是其现有技术。

多形汉逊酵母是具有工业和科学重要性的一种酵母种类。这种非常规的耐热亲甲烷性酵母是用于生产异源蛋白的最好的酵母系统之一(盖利森(Gellissen)，2000；盖利森(Gellissen)编辑.2002；苏科(Suckow)和盖利森(Gellissen)，2002)，它充当研究过氧化物酶体功能(范德克莱恩(Van der Klei)和维恩威斯(Veenhuis)，2002)、甲醇代谢、硝酸盐同化(西维里奥(Siverio)，2002)以及应激反应(乌比沃夫克(Ubiyvovk)等人，2006)的一个模型。多形汉逊酵母还具有在通过木质纤维素碳源发酵生产生物燃料中有用的潜力，因为它能够发酵木糖(瑞奥博弗(Ryabova)等人，2003)并且是最耐热的酵母种类中的一种(格拉(Guerra)等人，2005)。然而，多形汉逊酵母作为通过发酵生产乙醇的一种有机体是受限的，因为与其他酵母(例如酿酒酵母)相比它的生长对乙醇相当敏感。

概述