[实用新型]一种快速检测西维因农药残留的适体胶体金试纸

说明书

技术领域

本实用新型涉及农药残留检测技术领域，尤其涉及一种快速检测西维因农药残留的适体胶体金试纸。 

背景技术

西维因是一种广谱高效低毒的氨基甲酸酯类杀虫剂，其应用是注册范围最广的杀虫剂，其被广泛应用于对蔬菜、棉花、粮食的杀虫，果树上作为疏花剂，水产养殖中可为鱼塘去除有害生物。但是随着农业经济的发展，由于农药使用不当，在蔬菜、牧草和农作物上都可能会大量的残留，动物进食了含有农药的饲料或者饮用水都可能中毒，积累大量的农药在体内。大量农药的应用还会导致土壤环境中农药含量超标，对人类的生存环境产生了严重的危害。目前，对其检测的方法主要有气相和液相色谱法、超高效液相色谱串联质谱法、薄层色谱法等，这些方法技术很成熟，但是前处理复杂，不利于实现快速检测。 

西维因的分子量为200，为小分子化合物，本身不具有免疫原性。因此，制备抗体需要通过与大分子蛋白质交联才能成为免疫原，过程繁琐，且抗体的质量受抗原影响很大。核酸适体是一种比抗体具有更高特异性的配基，其体外筛选、体外制备的特点能够有效克服抗体制备周期长、生产成本高、技术难度大、批间差异大、克隆株不易有效保存的缺点，并且核酸适体开发周期短、生产成本低、使用方便在检测分析领域中的应用已经被广泛认可，因此，核酸适体在西维因的快速检测中具有良好的应用前景。 

实用新型内容

本实用新型的目的在于针对免疫层析过程中抗体制备繁琐的不足提供一种制备简单、灵敏度高、成本低、操作简单、检测时间短的试纸。 

本实用新型的快速检测西维因农药残留的适体胶体金试纸是由吸水垫、NC膜、金标结合垫、样品吸液层、检测线、质控线和底板组成；吸水垫、NC膜、金标结合垫、样品吸液层自右向左依次粘贴在底板上，NC膜上设有检测线和质控线，检测线位于质控线的左侧。 

金标结合垫的五分之四区域覆盖在样品吸液层下方。 

金标结合垫上含有经生物素标记的含有西维因适体组装的纳米颗粒聚集体。 

检测线中含有生物素标记的适体互补序列。 

质控线中含有链亲和素。 

样品吸液层是由玻璃棉或聚酯制成。 

金标结合垫是由纤维或玻璃棉制成。 

底板是由不吸水的硬质材料制成。 

底板优选是由PVC制成。 

    本实用新型试纸由吸水垫、NC膜、金标结合垫、样品吸液层顺次粘贴在底板上组成，金标结合垫不是完全覆盖在样品吸液层下，优选金标结合垫的五分之四区域覆盖于样品吸液层之下，可以将检测液体充分吸收后与金标适体反应，再层析至NC膜上进行反应，可以有效减少误差。 

    所述NC膜上有互补序列构成的隐形检测线（经生物素标记），以及由链亲和素形成的隐形质控线。 

    本实用新型试纸的底板可为PVC板或其他硬质而不吸水的材料；金标结合垫由纤维或玻璃棉制成；样品吸液层由玻璃棉或聚酯材料制成。 

在NC膜上的检测线和质控线相互平行且与样品流动方向垂直。 

当该试纸条用来检测样品时，把试纸条浸入处理过的样品液中，样品由于毛细作用进行侧向层析，首先进过金标区，将生物素标记的金标适体复溶，然后一起进行侧向层析。当经过NC膜上的显色检测区时，金标适体会和检测线上的互补序列及质控线上的链亲和素结合，而适体与西维因的结合力大于其与互补序列的，因而使得适体不能和检测线上的互补序列不能配对结合，使得条带颜色呈现深浅不同的红色，之后金标适体会继续层析与质控线上的链亲和素结合显色，确定试纸条的结果可信。 

    本实用新型试纸具有如下有益效果： 

1、灵敏度高。西维因快速检测试纸以胶体金标记高亲和力的适体为基础制备而成，以特异性适体建立起的西维因快速筛查技术最低能够检测出浓度约为0.8 mg/L的西维因。

2、操作简便快速。使用快速检测试纸只需将试纸插入样品液中，5分钟左右显示结果。 

3、显示结果形象、直观准确。快速检测试纸以显示红线“︱”和“︱︱”印迹作为检测的阳性和阴性标记。样品中西维因的含量与检测线的颜色呈反相关，样品中西维因含量越高，检测线的颜色越浅。 

4、成本低。使用快色检测试纸条，在不需要另配仪器的情况下，就可直接判定待测物的有无，使现场检测一步到位。且适体的筛选过程避免了动物免疫，筛选过程简便，后期制备也只需要化学合成，不需要制备腹水，制作周期和成本都远低于抗体。