[实用新型]用于光度式测定样品中的β-D-葡聚糖的存在的试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及液体样品或被制成液体形式的样品的分析。更具体地说，本实用新型涉及一种用于测定样品（例如，谷物来源的样品）中的β-葡聚糖的浓度的试剂盒。本实用新型还可用于其中天然地含有β-D-葡聚糖或者其中含有外加β-D-葡聚糖的非谷物来源的样品。本实用新型还提供了一种测定β-葡聚糖的浓度的方法，以及卡尔科弗卢尔染料的新用途。 

背景技术

在啤酒酿造过程中，β-葡聚糖是最重要的分析物之一。β-葡聚糖存在于麦芽和大麦的细胞壁中，并且在某些条件下在碾压过程中所释放β-葡聚糖可能不能充分地水解。这种β-葡聚糖能够堵塞加工过程的过滤器，并且高水平的β-葡聚糖会导致麦芽汁过滤和啤酒过滤性能变差。过量的β-葡聚糖可能导致产品浑浊，甚至损害啤酒的味道。由于这个原因，测定β-葡聚糖的浓度就很重要，特别是其分子量大小约为10,000Da或更大的β-葡聚糖聚合物部分。 

有关酿造工业中的标准分析方法的手册Analytica-EBC（欧洲酿酒协会）以及ASBC（美洲啤酒酿造化学家学会）提供了各种测定麦芽的总混联(1,3)(1,4)-β-D-葡聚糖含量、麦芽提取物（协定糖化）以及麦芽热水提取物（恒温糖化）方法。 

Analytica-EBC中所介绍的最常用的常规方法是基于使用卡尔科弗卢尔荧光染料通过流动注射（FIA）分析仪或者通过在微孔板甲酸中进行荧光分析的任何荧光测量（参看EBC法4.16.2）。所使用的荧光染料卡尔科弗卢尔在溶液中与含有分子量超过10,000Da的高分子量β-葡聚糖复合，以增加染料的荧光强度。 

Analytica-EBC还例举了基于吸收波长在550nm的β-葡聚糖-染料复合物的形成来测定β-葡聚糖的分光光度分析法（EBC4.16.3)。（EBC法4.16.3是含有染料混合物的商品化试剂盒，刚果红作为一种或主要的组分）。 

现有方法存在一些缺陷。 

卡尔科弗卢尔法是基于染料与β-葡聚糖之间的对光和氧高度敏感的反应。 EBC8.13.2、4.16.2和3.10.2中所公布的那种荧光法尚未应用于分立式分析仪；而自动分立式分析仪通常是基于光度分析法。 

另一方面，采用所推荐的光度法（刚果红，EBC方法集4.16.3）所获得的结果与采用卡尔科弗卢尔法所产生的结果不相吻合。这明显地反映出这两种方法测定的是β-葡聚糖聚合物的不同部分的事实。实际上，所使用的染料卡尔科弗卢尔与刚果红对于不同种类的分子分数很敏感。进一步来说，光度EBC刚果红法很难在自动分析仪中使用，这是因为它优选需要一个预处理柱以区分不同大小的分子。该方法也很慢。 

除了在EBC手册中规定的具体方法外，本领域中还有其他的分析β-葡聚糖浓度的方法。 

一种替代的分光光度法是基于使用Lichinase酶，该方法包括测量和测定从β-葡聚糖中获得的作为酶降解产物的葡萄糖。但是，此方法也没有得到与荧光卡尔科弗卢尔法相吻合的结果，这是因为酶将所有的聚合物链拆分为葡萄糖单体，这意味着分析结果将反映葡聚糖分子的所有大小/聚合物的总浓度。正如EBC4.16.3中的分光光度法，此方法也很难用于自动操作，这是因为它需要加热以及样品中原葡萄糖含量的测量。 

总之，Analytica-EBC中所述的且常用于酿造工业中的荧光分析法需要流动注射分析或者微孔板阅读器，以进行荧光性并以及因此β-葡聚糖的可重现量化。手动的光度法是基于分子量大小约2.5×10⁵的β-葡聚糖吸附到染料刚果红上和/或在测量之前他们需要进行依赖大小的过滤来获得最佳效果。 

荧光法和分光光度法的结果彼此不相吻合，为此，分光光度法方法在酿造工业中的应用范围较小。 

实际上，啤酒工业必须遵循EBC或ASBC的建议。因此，卡尔科弗卢尔一直都用于荧光检测，其商品名为卡尔科弗卢尔和荧光增白剂28。 

实用新型内容

本实用新型的目的是解决至少一部分本领域中存在的上述问题，并提供一种用于选择性地测定液体样品中的β-D-葡聚糖的技术方案。 

本实用新型提供了一种容易适用于样品、如采自谷物（如燕麦或大麦）的加工过程的液体样品的分析方法，其可任选地可以在自动分析仪上施行。这种谷物 样品可能可任选地含有单独添加的β-D-葡聚糖。作为加工的结果，与样品中天然存在的水平的含量相比，该样品可能还会出现β-D-葡聚糖含量的贫化。