[实用新型]一种MicroRNA定量检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型属于生物技术领域，具体涉及一种MicroRNA定量检测试剂盒。 

背景技术

MicroRNA是近年来在多种真核细胞及病毒中发现的一类来源内源性染色体上的非编码单链RNA，长度为21～25nt的短序列，在进化上具有高度的保守性，能够通过与靶mRNA特异性的碱基互补配对，引起靶mRNA降解或者抑制其翻译，从而对基因进行转录后的表达调控（O`Donnell KA,Wentzel EA,Zeller KI,et al.e-Myc-regulated microRNAs modulate E2F1expression[J].Nature，2005,4(7043):839.）。由于microRNA序列在不同的生物中具有一定的保守性，目前普遍认为MicroRNA的功能是参与生命的一些基本过程，如发育过程中的细胞增殖、细胞死亡、应激反应和脂肪代谢等，越来越多的证据表明MicroRNA在细胞中起着调控基因表达的重要作用。最近的研究发现MicroRNA与细胞的癌变有着极为密切的关系，已经发现MicroRNA与肺癌、结直肠肿瘤、伯基特淋巴瘤和慢性淋巴细胞白血病等肿瘤疾病有关（Meltzer PS.Cancer genemics:Small RNAs with big impacts[J].Nature,2005,435(7043):745.）。 

由于MicroRNA分子只有20-25nt左右大小，检测较为困难。以前主要采用的方法是Northern blot等杂交的方法进行检测，方法繁琐，不易成功，且MicroRNA极易降解，对于结果影响也较大。 

为了克服之前检测方法的缺陷，Allawi等建立了Invader Assay的方法(Allawi HT，Deahlberg JE，OlsonS,et al.Quantitation of microRNAs using a modified Invader assay.RNA,2004,10:1153-1161)，Liu等建立了寡核苷酸芯片方法(Liu C，Calmn GA，et al.An oligonucleotide microchip for genome-wide micro RNA profiling in hum an and mouse tissues.PNAS，2004，101(26)：9740-9744)，这种方法提高了检测的敏感性及实用性，但这种方法需要荧光标记和荧光仪或芯片检测仪，而且由于micro RNA分子太小，应用也受到一定的限制。 

如今，对MicroRNA前体的检测主要是采用RT-PCR的方法(Schmittgen TD，Jiang J，Liu Q，et al.A high-throughput method to monitor the expression of micro RNA precursors.Nucleic Acids Research．2004，32(4)：e43)，采用随机引物或与MicroRNA前体互补的引物直接进行反转录，但是这仅仅只能针对特异的MicroRNA，而且半定量的方法不能准确地表现出MicroRNA的表达量，所以该方法已经渐渐退出了MicroRNA分子的检测的行列。