[发明专利]一种基于量子点的双夹心免疫荧光定量检测人Inhibin-B的试剂盒制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于免疫诊断技术领域，涉及基于量子点的免疫荧光定量检测，具体涉及一种基于量子点的双夹心免疫荧光定量检测人Inhibin-B的试剂盒及其制备和应用。

背景技术

目前临床上国内各诊疗单位评估卵巢功能主要根据年龄、窦卵泡的数目（Antral follicle count）、滤泡刺激激素（FSH）和雌激素（E2）水平等。但上述传统方法检查容易受到各种因素影响而产生误差，同时容易受到检测者主观判断而产生结果偏倚；此外，上述指标的检测受月经周期的时限制约，且其检测数值受到月经周期的波动较大，因而无法准确给予判断。能否寻找某一有效指标，在月经不同时期均能有效评估卵巢功能是目前妇科生殖内分泌面临的主要问题之一。近年来，临床上开始采用抑制素B激素作为卵巢功能评估的一项指标。抑制素B是一种由女性生长期卵泡颗粒细胞分泌的异二聚体蛋白质激素。其通过选择性抑制卵泡刺激素（FSH）的分泌从而调节卵泡的发育。完整的抑制素B分子是一个分子量约为32KD的分子，由两个不同的亚单位（α亚单位和β亚单位）经二硫键连接而成。研究表明，抑制素B水平与卵巢储备功能呈正相关。

目前在欧美，大部分临床诊疗中心已将Inhibin-B作为评估卵巢储备的常规指标。主要所采用酶联免疫显色法测定（enzyme-linked immunoassay,Elisa)。但是，酶免疫分析法灵敏度低，影响因素较多，易造成假阴性和假阳性结果。量子点（QDs）具有连续而宽的激发光光谱。其荧光可被波长小于其量子限域峰的任意光源所激发，且荧光谱峰位置可以通过改变量子点物理尺寸进行调控。这样仅用一种波长的激发光源便可激发多种不同颜色荧光的量子点进行多元荧光检测。有效提高了分辨率和灵敏度。因此，量子点免疫分析法远远优于酶免疫测定。

目前国内尚未见检测Inhibin-B的注册试剂盒供应，该项检测在临床上的研究也还未广泛展开。且目前国外的Inhibin-B检测试剂盒多采用的是酶联免疫方法，但是酶免疫分析法灵敏度低，影响因素多，易造成假阴性和假阳性。而根据大量的试验结果及临床应用资料，从实用性、稳定性、准确性及临床应用前景来看，量子点免疫分析法远远优于酶免疫测定。

发明内容

本发明的目的在于提供一种量子点免疫荧光定量检测人抑制素B的试剂盒。

本发明的另一目的在于提供上述试剂盒在检测卵巢储备功能中的应用。

本发明所采取的技术方案是：

一种基于量子点的双夹心免疫荧光定量检测人Inhibin-B的试剂盒，该试剂盒包括Inhibin-B蛋白标准品，包被Inhibin-B特异性多克隆抗体的酶标板，CdTe量子点标记的Inhibin-B单克隆抗体。

进一步的，上述Inhibin-B蛋白标准品为原核细胞表达的重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

进一步的，上述Inhibin-B特异性多克隆抗体是以原核表达的Inhibin-B重组蛋白作为免疫原合成的兔抗人Inhibin-B多克隆抗体。

进一步的，上述Inhibin-B单克隆抗体是以原核表达的Inhibin-B重组蛋白作为免疫原合成的鼠抗人Inhibin-B单克隆抗体。

进一步的，本发明试剂盒还包括：标记抗体稀释液、洗板液、封闭液和样品稀释液。

本发明的有益效果是：

试剂盒中作为检测抗体的单克隆抗体，由于采用的量子点标记法具有激发光谱宽，自发荧光弱，荧光稳定和半衰期长等特点，大大的提高了检测的分辨率、灵敏度和特异性。

本发明的试剂盒以CdTe量子点标记鼠抗人Inhibin-B单克隆抗体作为检测抗体，更好的去除背景信号，提高检测的分辨率和灵敏度；且通过荧光酶标仪测量荧光强度获得检测结果，所发射的荧光谱峰狭窄，自发荧光弱，灵敏度高；荧光强度高，稳定时间长；克服了现有的抑制素B酶免疫检测试剂盒灵敏度低，特异性差的现状，提高检测的分辨率、灵敏度及特异性，更为有效地对早期卵巢储备功能进行检测及风险评估。

本发明用量子点免疫分析法检测Inhibin-B是先进而有效的方法，能够有效的提供临床检测的分辨率、灵敏度及特异性，且检测方法操作简便，实用性强。

附图说明

图1为人Inhibin-B重组蛋白纯化前后的western blotting图片；

图2为纯化后的兔抗人Inhibin-B多克隆抗体的标准曲线；

图3为纯化后的鼠抗人Inhibin-B单克隆抗体的标准曲线；

图4为Inhibin-B量子点免疫分析检测试剂盒的检查区间曲线。