[发明专利]麦角硫因的检测方法

说明书

本发明涉及一种麦角硫因的高压液相色谱检测方法，包括采用亲水作用色谱（HILIC）分析色谱柱对含有麦角硫因的样品进行高压液相色谱分析，所述色谱柱采用HILIC填料作为固定相，采用（80～95）∶（20～5）的乙腈‑水（v/v）溶液作为流动相，所述溶液的pH为5.6～8.0，柱温为25～45℃。本发明还涉及麦角硫因的定量检测方法。

技术领域

本发明属于生物化学技术、分析化学领域，涉及麦角硫因及其含量的测定方法。

背景技术

麦角硫因（L-Ergothioneine，EGT）是一种稀有的天然手性氨基酸类强抗氧化剂，是一种独特的细胞生理保护剂，具有抗氧化，螯合金属离子，防止紫外辐射以及调节生物能量、基因表达、免疫系统等诸多功能。由于麦角硫因特殊的生物学功能和药理活性，如：对抗炎症，防御神经组织退化，阻止铜引发DNA和蛋白质发生氧化损伤，抑制发育性缺陷，保护肝脏等，并且人和动物摄入后不会产生任何的毒副作用，属于通常认为安全的（generallyrecognized as safe,GRAS）产品，因此，麦角硫因在医药、食品、保健品和化妆品等行业具有广泛的应用前景。

麦角硫因的制备方法有化学合成法、天然生物提取法和生物合成法。食用蕈菌深层发酵生物合成麦角硫因具有产量高、成本低、易实现规模化生产及产品安全等优势。蕈菌发酵合成的麦角硫因绝大部分积累于菌丝体内，因此快速准确地检测菌丝体和发酵液中的麦角硫因，对于麦角硫因的研究和生产都至关重要。

至今尚没有麦角硫因检测方法的标准。国内外基本采用高压液相色谱技术测定麦角硫因，所用检测柱普遍为反相C₁₈柱。Huynh N.D.Bao利用两根串联的SymmetryShield^TMC₁₈柱（250mm×4.6mm，5μm）定量测定从金针菇子实体中提取的麦角硫因，使用的流动相是pH7.3含有3%乙腈和0.1%三乙胺的磷酸钠缓冲液（Huynh N.D.Bao a,Yoichi Shinomiya b,Hiroaki Ikeda,et al.,Preventing discoloration and lipid oxidation in darkmuscle of yellowtail by feeding an extract prepared from mushroom(Flammulinavelutipes)cultured medium[J].Aquaculture，2009,doi:10.1016/j.aquaculture.2009.06.042.）。N.Joy Dubost采用两根串联的Econosphere C₁₈柱（250mm×4.6mm，5μm）分离检测从蕈菌子实体中提取的麦角硫因，使用的流动相是pH7.3含有3%乙腈和0.1%三乙胺的磷酸钠缓冲液（N.Joy Dubost,BoxinOu,RobertB.Beelman.Quantification of polyphenols and ergothioneine in cultivatedmushrooms and correlation to total antioxidant capacity[J].Food Chemistry,2007,105:727-735.）。周念波使用Hypersil ODS C₁₈柱（250mm×4.6mm，5μm）测定从双孢菇子实体中提取的麦角硫因，所用流动相为乙腈-水（3∶97，v/v）溶液（周念波，朱艳琴，殷勤红．高效液相色谱法测定双孢菇中麦角硫因的含量[J]．食品科技，2010，35(10):271-272.）。Chih-Hung Liang利用Chrospher100C18柱测定从杏鲍菇深层发酵的菌丝体中提取的麦角硫因，所用流动相为含有3%乙腈和0.1%三乙胺的磷酸钠缓冲液（Chih-Hung Liang,Ling-Yi Huang,Kung-Jui Ho,et al.Submerged cultivation of mycelium with highergothioneine content from the culinary-medicinal king oyster mushroomPleurotus eryngii(higher basidiomycetes)and its composition[J].InternationalJournal of Medicinal Mushrooms,2013,15(2):153-164,）。姜文侠、刘琦和周涛建立的反相高压液相色谱检测方法是：色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C₁₈柱，两根串联使用，流动相为甲醇-水（1∶99，v/v）溶液（姜文侠，刘琦，周涛．麦角硫因的检测方法[P]．CN201210392294.8.）。