[发明专利]荔枝花粉收集保存方法

说明书

技术领域

本发明属于果树授粉技术领域，更具体涉及一种荔枝花粉的收集保存方法。

背景技术

荔枝是广东、广西、海南和福建等四省区最重要的水果。目前荔枝产业存在品种结构不合理和成熟期非常集中二大难题，而品种创新是解决这二大难题不可缺的一个重要环节。一直以来，主要通过实生选种实现荔枝品种的创新。由于长期采取嫁接、圈枝的无性繁殖方法，单一品种的种植，以及因土地征收导致的许多种质资源的丢失，产区荔枝的遗传多样性不断丧失，通过实生选种实现荔枝品种的创新难以为继。人工杂交育种将是荔枝品种创新的主要途径，花粉的收集保存是荔枝人工杂交育种实现种质创新的重要环节。

目前关于荔枝花粉的收集保存没有成熟的技术。前人研究的荔枝花粉收集保存方法，仅适用于花粉即采即用和花期相遇的品种之间授粉，以及早熟品种的花粉授晚熟品种，最长在-30℃冰箱内贮藏150天，只能满足当年授粉需要，不能解决第二年授粉的问题。并且，前人的干燥方法多采用太阳光自然晾晒，这种方法受限于天气状况，而且干燥效果不稳定。

发明内容

本发明的目的在于提供一种荔枝花粉的收集、干燥、保存方法，贮存一年发芽率不变可用于第二年的人工授粉，解决因自然环境不良等原因造成的荔枝品种授粉受精困难问题，满足授粉的需要，特别是早熟品种的人工授粉，同时对荔枝种质创新具有重要的应用价值。

经长期的调研发现，荔枝雄花发育可分为三个阶段，第一阶段，花药刚伸出雄花花托，花丝不明显；第二阶段，花丝伸长一半；第三阶段，花丝伸长充分但花药没有开裂。在雄花发育第一阶段提取花药并干燥，没有发现成熟的花粉；雄花发育第二阶段和第三阶段提取花药并干燥，大量成熟的花粉存在。因此，成熟花药定义为雄花发育第二阶段至第三阶段的花药。为此，本荔枝花粉（花药）采摘的标准是：采摘成熟未开裂的花药，即该花药指雄花发育第二阶段至第三阶段的花药，即花丝伸长一半或充分伸长但花药没有开裂的。

采回来的花药，如在阴雨天气摘采时，可将花药先放置在吸水纸上，利用吸水纸将花药表面上的水吸干，再将花药装在玻璃培养皿内，装入的花药量以均匀铺开以能均匀干燥为准，优选为均匀铺开两层内的花药厚度。花药装好后将其放入干燥箱内，而花药的干燥是花粉收集保存的重要环节。经研究发现荔枝花药干燥的第1个小时，水分挥发最快，达到每小时水分相对挥发量42.65%；干燥的第2个小时，每小时水分相对挥发量20.10%；从第3个小时开始，水分挥发很少。同时，干燥过程中花药的开裂节奏较水分的挥发节奏慢，干燥的第1小时出粉率只有10%，第2小时出粉率62%，第3小时出粉率85%，第4小时出粉率达到93%。因此荔枝花药干燥过程可分成二个阶段，最初的2小时是水分挥发阶段，第2-3小时是花药开裂阶段。干燥温度45℃～50℃，会导致荔枝花粉发芽率明显下降，花药出粉率也低于70%；干燥温度30℃～35℃，不会导致花粉发芽率下降，但干燥时间影响花药出粉率。因此本发明综合提出了荔枝花药干燥的适宜技术指标，这种干燥技术不受天气条件影响，任何天气条件下均可采集荔枝花粉。这技术就是利用干燥箱进行对玻璃培养皿中的花药进行干燥处理，处理时分为花药水分挥发阶段和花药开裂阶段，其水分挥发阶段在40℃下进行，花药开裂阶段在30℃～35℃下进行。

具体的干燥箱进行对玻璃培养皿中的花药进行干燥处理操作是：首先用40℃温度去除花药水分的50-60%；然后下调温度至35℃去除花药的大部分水分；最后将温度再次下调至27℃～28℃，将花药干燥至开裂阶段即可。其干燥时间，可视采摘回来的花药干燥程度而定，当晴好天气时，首先设定温度40℃干燥2小时，然后设定温度35℃，干燥1小时，最后设定温度27℃～28℃，干燥1～2小时；当阴雨天时，首先设定温度40℃干燥2小时，然后设定温度35℃，干燥2小时，最后设定温度27℃～28℃，干燥4～6小时。

将花药干燥后，利用150目不锈钢筛筛选出花粉，倒入2ml容量的离心管，密封后放置-86℃以下超低温冰箱保存即可完成保存。

关于贮藏温度，其它植物的花粉有报道在液氮中贮藏效果较好，但贮存液氮中存在贮存前预冷及使用前解冻的问题，在这些过程中对荔枝花粉发芽率影响较大，本发明采用-86℃以下超低温冰箱贮存避免了以上的问题，取得了良好的保存效果。

经上述调研发现得出，本发明的目的可以通过如下技术方案达到：

荔枝花粉的收集保存方法，其采集保存方法步骤是：

1、采集发育阶段成熟未开裂的荔枝花药，将采集到的花药装入玻璃培养皿中；