[发明专利]一种西红花苷Ⅰ单体、西红花苷Ⅱ单体的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物化合物单体的制备分离方法，尤其是从西红花中提取西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ单体的分离纯化方法，属中药活性成分的分离纯化技术领域。 

背景技术

西红花（Stigma Croci）又称藏红花、番红花，英文名:Saffron，为鸢尾科植物番红花Crocus sativus L.的柱头，其原生地在地中海沿岸至喜玛拉雅山麓。据《本草纲目》记载，西红花能“活血、主心气忧郁，又治惊悸”。因此，中医用于治疗心血管疾病。目前，西红花的主产地在伊朗、希腊和西班牙等国，在我国只有少量栽培。由于其产量极低，采收耗时费力，在我国被列为珍稀名贵中药材，为国家中医药管理局重点支持发展的中药材品种。西红花具有三个世界之最：世界上最贵的药用植物、最上好的染料、最高档的香料，西红花在西班牙等欧洲国家又被称为“红色金子”、“植物黄金”、“软黄金”。我国现已在上海、浙江、河南、北京、新疆、四川、广西等省市引种成功，其中上海市崇明县是我国最早引种西红花并实现产业化生产的地区，目前实施GAP的栽培面积保持在2500亩以上，每年出产优质干花丝2000kg以上，年供应成品优质种球50吨以上。 

西红花苷Ⅰ（Crocin I），分子式为C₄₄H₆₄O₂₄，分子量为976.96，结构式如下： 

西红花苷Ⅱ（Crocin II），分子式为C₃₈H₅₄O₁₉，分子量为814.82，结构式如下：

 

西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ来源于鸢尾科植物番红花Crocus sativus L.的干燥柱头，是西红花药材中的主要活性成分，具活血化瘀、凉血解毒、解郁安神等作用。目前主要采用硅胶柱层析和结晶相结合的方法进行西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ单体的精制以及含量测定。生产周期长，试剂浪费严重，产品收率低。相关文献及专利信息如下：1、中国专利 CN 102276664 A 公开了一种利用高速逆流色谱法制备西红花苷-Ⅰ的方法，该方法是取乙酸乙酯、乙醇、水混合分层后，取上相充满高速逆流色谱柱，转动主机，泵入下相做流动相，将栀子黄色素溶于下相由进样阀进样，SP-200紫外检测器检测，根据图谱收集目的成分，减压干燥流分，即得。该方法采用高效逆流对试剂的浪费大，且只能得到较高纯度的西红花苷Ⅰ。2、《药物分析杂志》2009年09期“西红花中西红花苷-1和西红花苷-2含量测定方法的建立”，采用高效液相色谱法，使用Zorbax C_(18)色谱柱，乙腈和水为流动相梯度洗脱，检测波长440nm，流速1.0mL·min～(-1)；同时采用单因素分析的方法，对影响含量测定结果的主要因素如提取溶剂、超声处理时间、提取温度及是否避光等进行考察。结果:西红花苷-1在5.2～165μg·mL～(-1)，西红花苷-2在2.7～85μg·mL～(-1)范围均呈良好线性关系，相关系数分别为0.9999和0.9998，平均回收率分别为102.5%和98.2%。该技术着重于对产品纯度检测的研究，且梯度不利于高效色谱的连续生产。

发明内容

本发明的目的在于提供一种西红花苷Ⅰ单体、西红花苷Ⅱ单体的分离纯化方法。该方法分离效率高，生产周期短，工艺稳定，操作简便，成本低廉，可实现同时大量分离制备高纯度的西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ两种单体。 

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下： 

一种西红花苷Ⅰ单体、西红花苷Ⅱ单体的分离纯化方法，其特征在于：以鸢尾科番红花属的多年生花卉的干柱头为原料，通过提取、浓缩、过滤、高效制备液相色谱分离、葡聚糖凝胶柱层析、产品回收得到西红花苷Ⅰ单体、西红花苷Ⅱ单体，具体工艺步骤如下：

1）提取

将西红花粉碎成1～4mm的粗粉，按体积/质量加入40～80倍的乙醇溶液，提取3～4次，每次2～3小时，合并过滤液，待下一步处理；

所述乙醇溶液的体积百分比浓度为90～95%；

通过对该提取步骤中工艺参数的有效控制，可以确保西红花苷能够较完全从药材中提取出来。

2）浓缩 

将步骤1）所得的过滤液，60℃浓缩至无醇，所得浓缩液，进行下一步处理；

3）过滤

将步骤2）所得的浓缩液用0.45μm滤膜过滤，所得过滤液为制备西红花苷Ⅰ单体、西红花苷Ⅱ单体的原料；

通过膜过滤能有效保护设备不受损坏。

4）HPLC制备 

色谱条件如下：