[发明专利]一种化学降解法获得及检测生物来源糖胺聚糖二糖的方法

权利要求书

1.一种检测生物来源糖胺聚糖二糖的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将生物来源糖胺聚糖脱乙酰化，得脱乙酰糖胺聚糖；

(2)将脱乙酰糖胺聚糖用亚硝酸降解，得糖胺聚糖二糖；

(3)将糖胺聚糖二糖用衍生试剂衍生

取步骤(2)所得糖胺聚糖二糖浓缩至干并完全溶解于水，然后调节pH值至碱性，加入吡唑啉酮类衍生试剂，反应完成后用氯仿萃取三次去除未反应的衍生试剂；

(4)用液相色谱(LC)法或液相质谱联用(LC-MS)法检测步骤(3)所得衍生后的二糖。

2.如权利要求1所述的一种检测生物来源糖胺聚糖二糖的方法，其特征在于，步骤(1)所述的脱乙酰化反应步骤包括：

将生物来源糖胺聚糖溶于含有N₂H₄·H₂SO₄的N₂H₄·H₂O溶液中，加热使其溶解，然后密封加热到91-114℃，反应4-20h，反应完成后，冻干，除去N₂H₄得脱乙酰糖胺聚糖。

3.如权利要求1所述的一种检测生物来源糖胺聚糖二糖的方法，其特征在于，步骤(1)所述的脱乙酰化反应步骤包括：

将生物来源糖胺聚糖溶于含有N₂H₄·H₂SO₄的N₂H₄·H₂O溶液中，加热使其溶解，然后密封加热到98℃，反应8h，反应完成后，冻干，除去N₂H₄得脱乙酰糖胺聚糖。

4.如权利要求1所述的一种检测生物来源糖胺聚糖二糖的方法，其特征在于，步骤(2)所述的亚硝酸降解步骤包括：

将脱乙酰糖胺聚糖浓缩至干，溶于水中，加入pH为1.5的亚硝酸钠水溶液，在0-5℃条件下反应，调节pH到4.0，加入pH为4.0的亚硝酸，在0-5℃条件下反应，加入氨水终止反应，得糖胺聚糖二糖。

5.如权利要求1至4任意一项所述的一种检测生物来源糖胺聚糖二糖的方法，其特征在于，步骤(1)所述的脱乙酰反应步骤中生物来源糖胺聚糖与N₂H₄·H₂O溶液的质量体积比(mg／mL)为1∶0.5-1，N₂H₄·H₂O溶液中含10％N₂H₄·H₂SO₄。

6.如权利要求1至4任意一项所述的一种检测生物来源糖胺聚糖二糖的方法，其特征在于，步骤(2)所述的亚硝酸降解步骤中脱乙酰糖胺聚糖水溶液与亚硝酸钠水溶液、亚硝酸、氨水的体积比为1∶1∶1∶0.6。

7.如权利要求1至4任意一项所述的一种检测生物来源糖胺聚糖二糖的方法，其特征在于，步骤(3)所述的糖胺聚糖二糖与吡唑啉酮类衍生试剂的质量比为1∶6-60。

8.如权利要求1至4任意一项所述的一种检测生物来源糖胺聚糖二糖的方法，其特征在于，步骤(3)所述的吡唑啉酮类衍生试剂包括1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)，1-苯基-3-氘代甲基-5-吡唑啉酮(D3PMP)，1-氘代苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(D5PMP)或1-氘代苯基-3-氘代甲基-5-吡唑啉酮(D8PMP)。

9.如权利要求1至4任意一项所述的一种检测生物来源糖胺聚糖二糖的方法，其特征在于，步骤(3)所述的吡唑啉酮类衍生试剂包括PMP、D3PMP、D5PMP、D8PMP中的一种或任意几种联用。