[发明专利]一种去除肝素钠中有机残留的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生化制药领域，具体涉及到一种去除肝素钠中有机残留的方法。

背景技术

硫酸软骨素钠，英文名Chondroitin sulfate sodium，是动物软骨中提取的酸性粘多糖，多存在于动物的软骨、喉骨、鼻骨(41％)、牛、马中膈和气管中，其分子结构为β-D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基半乳糖通过β1→3糖苷键形成的重复二糖单位所组成的多糖链。

硫酸软骨素钠主要用于治疗风湿和类风湿疾病的药物，还具有抗凝、抗癌、抗血栓、降血脂等作用，可用于治疗头痛、偏头痛、冠心病、心绞痛等症状。在国外，对硫酸软骨素钠药理的研究已经达到分子水平。

目前国内提取硫酸软骨素钠的方法主要有三种：盐解法、碱解法和酶解法。主要采用的分离纯化技术有：乙醇沉淀法、离子交换色谱法、纤维素分离法、季铵盐配合法、吸附法、区带电泳分离法等。在以上的集中提取方法中，收率虽然可以达到很高的水平，但生产方法都存在很大问题，如盐解法工艺中存在除酸性蛋白调节PH值1-2在产品量大时耗时很长，硫酸软骨素中的氨基易被解离下来，从而影响了硫酸软骨素的收率。

发明内容

本发明的目的是，提供一种提高硫酸软骨素收率的制备方法，此方法主要从节能、节约试剂、缩短生产时间、简化生产工艺等角度出发，提供一种提高硫酸软骨素收率的制备方法，该方法利于工业化生产。

由于硫酸软骨素和软骨中的蛋白质是以糖肽共价键结合在一起的，在碱性条件下，以胰蛋白酶为催化剂，糖胺聚糖可以从软骨组织中的胶原蛋白中分离出来。根据这个原理，本工艺直接把胰蛋白酶加入，调节反应的PH，温度条件，直接生产硫酸软骨素。这样以来，缩短了工艺流程，反应时间只需要4-8小时，用碱量比稀碱酶解法节省80％以上，收率不但没有下降，反而比原来要高3-5个百分点。

本发明的步骤如下：

1、将洁白干净的动物软骨放入反应罐内，加入适量的水浸泡，并加入软骨重量的0.1％-1.6％的胰蛋白酶，调节PH在8.5-9.5之间，控制温度在40-55℃之间，搅拌2-9小时；

2、当动物软骨反应完全后，用盐酸调节酶解液使其PH在5.5-7.5之间，加热至65-80℃，保温10-40分钟；

3、待酶解液冷却后，过滤或离心除渣，过滤后得较清澈的滤液酶解液，加入酶解液重量0.2％-2.0％的氯化钠，使PH在3.5-5.5之间，搅拌20-50分钟，过滤或离心除渣。

4、将上步所得酶解液加入其体积2-4倍的浓度为90％的乙醇，使乙醇浓度达到50％-80％，沉淀；

5、将上步沉淀物用浓度为95％的乙醇复沉2到3遍，干燥后即得所述的硫酸软骨素成品。

本发明的优点为：本制备方法通过对目前工艺的改进创新，采用进一步酶解法生产硫酸软骨素，通过正交实验，找到生产工艺的优化生产工艺条件为：水解时间为6小时，水解温度为48℃，胰蛋白酶用量为0.8％软骨重，三种因素中对水解影响程度主要为水解温度，其次为酶用量和水解时间。整个反应过程PH值控制在8.5-9.5之间。此最佳组合可使硫酸软骨素收率达到43％及以上。采用新工艺后，可简化生产流程，大大缩短生产时间，减少碱用量，同时减少下游提纯的难度，减轻对环境的污染。