[发明专利]包被免疫球蛋白（IgG）酶标条的保存处理方法

说明书

技术领域

本发明涉及农药免疫检测技术，尤其是应用于食品检测领域中，对于农药残留成分检测。在通过酶联免疫检测农药残留时，酶联免疫检测时的包被免疫球蛋白（IgG）酶标条需要保持活性。本发明具体涉及的是包被免疫球蛋白酶标条的保存处理方法。 

背景技术

ELISA检测技术是近几十年发展起来的新技术，其核心是抗原抗体结合反应。在直接竞争法酶联免疫吸附测定（ELISA，Enzyme-linked immunosorbent assay）过程中，需要将特异性抗体（IgG,Immunoglobulin，免疫球蛋白）包被在酶标条上，然后进行相关的实验。由于免疫球蛋白属于活性蛋白，包被在酶标条上后如果不进行适当的技术处理，很快就会因为细菌等污染而变质，失去活性，导致酶标条失效。目前，生产包被免疫球蛋白的酶联免疫试剂盒的公司在试剂盒组分上大都申请专利公开技术进行保护，但是对于酶标条的保存处理技术，作为核心技术，在文献中都没有公开。 

申请人作为出入境检验单位，需要经常对各种食品的农药残留进行检测。目前采用农药免疫检测技术进行检测。首先要将农药分子与载体蛋白质连接起来，人工合成农药-载体蛋白质结合物免疫原，然后以此免疫动物制备特异性抗血清。在直接竞争ELISA法的实验中，要将特异性抗血清的IgG分离出来并人工合成酶标半抗原，进而建立免疫学检测方法。农药免疫学检测方法与传统的农药分析方法相比，具有不需要复杂昂贵的仪器设备，操作简便，样品前处理简单，检测快速，检测容量大，成本低廉等特点，因此具有潜在的广泛的应用价值。目前农药免疫检测技术中酶联免疫吸附检测技术已经被广泛应用于食品中农药残留检测。由于经常需要应用到包被免疫球蛋白的酶标条，由于外购成本高昂，因此需要自制，但是自制的酶标条如果当下不使用，则无法保存，因此在每次检验测试前都需制备酶标条，造成检测时间比较长。因此如何保持自制的酶标条的长期内保持活性，成了难题。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种包被免疫球蛋白IgG的酶标条的保存处理方法，该保存处理方法简单，能够保证自制的酶标条活性达4个月之久。 

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是一种包被免疫球蛋白（IgG）酶标条的保存处理方法，其步骤如下：1）处理液制备：取0.01moL/L pH7.2磷酸盐缓冲溶液1L，加热至沸腾并保持3分钟；然后冷却至室温；然后依次加入牛血清蛋白10～40g、卵清蛋白 （OVA）10～40g，搅拌混合均匀；再加入叠氮钠0.010～0.040g、硫柳汞钠盐0.1～0.60g，搅拌混合均匀，即制得处理液备用； 

2)利用步骤2）制备的所述处理液处理包被有特异性抗体免疫球蛋白IgG的酶标条，在所述酶标条每孔中加入所述处理液400μL，于37℃条件下水浴1h；将所述酶标条甩干，拍干残余的水分；装进铝箔袋充入氮气在4℃保存。 

所述酶标条制备方法为，首先将免疫球蛋白IgG50ul用PH9.1碳酸盐缓冲液按照1:100稀释比进行稀释获得免疫球蛋白IgG稀释使用液；在酶标条每孔中加入100ul包被缓冲液，然后用免疫球蛋白IgG稀释使用液从酶标条第1孔开始横向倍比稀释，5℃包被过夜，次日倒掉包被缓冲液，每孔加250ul磷酸盐缓冲溶液0.01moL/L pH7.2洗涤三次，每次间隔三分钟，制得所述酶标条。碳酸盐缓冲液配制：0.10.1mol/L的碳酸钠1.1mL,加入8.9mL0.1mol/L碳酸钠中，混合后加水定容至100mL。 

本发明的包被有免疫球蛋白IgG的酶标条通过处理液处理进行保存，通过实验测试可知，处理过的酶标条在2～8℃条件下至少可以保存4个月之久。本发明的处理液处理的酶标条，通常用于进行食品中农药残留检测。 

对于经本发明的处理液处理过的包被免疫球蛋白IgG的酶标条的活性检测应用的ELISA直接竞争法。其检测原理，以农药甲霜灵的检测为例。首先制备甲霜灵免疫原，然后进行动物免疫制备特异性抗体免疫球蛋白IgG，然后进行在在酶标条上包被免疫球蛋白IgG，在包被的酶标条中加入待测标本和酶标记的半抗原中进行竞争反应结合，加入酶底物显色液、终止液，利用酶标仪读取吸光光度值，根据标准曲线进行定量。进行处理过的酶标条活性测试时，将待测标本替换为浓度已知的甲霜灵抗原标本，与测试结果的浓度对比可知酶标条的活性保持程度。 

具体实施方式

现结合实例对本发明的包被免疫球蛋白IgG的酶标条保存处理方法进行具体说明。本发明涉及的试剂均为分析纯。