[发明专利]一种来源于斜卧青霉的内切葡聚糖酶

说明书

技术领域

本发明属于微生物工程技术领域，具体涉及一种来源于斜卧青霉的内切葡聚糖酶。

背景技术

木质纤维素作为地球上第一大可再生资源，其开发和利用越来越得到各国的重视。木质纤维素的生物降解和转化首先通过纤维素酶系来实现。纤维素酶系广泛存在于多种微生物中，主要由以下三种酶组成：内切β-葡聚糖酶、外切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶，此外还有很高活性的木聚糖酶活性。

纤维素广泛存在于自然界的生物体中，细菌、真菌、动物体内等都能产生纤维素酶。一般用于生产的纤维素酶来自于真菌，比较典型的是木霉属、曲霉属和青霉属。

本发明从斜卧青霉（Penicillum decumbens）中克隆得到的一个纤维素酶基因----内切葡聚糖酶（endoglucanaseⅡ，简称EGⅡ），并构建了该基因的重组表达菌株，为工业化生产内切葡聚糖酶提供了有力的技术支持。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型内切葡聚糖酶及其应用。本发明构建含斜卧青霉内切葡聚糖酶基因的毕赤酵母工程菌株，高效重组表达该酶，从而实现该酶的广泛应用，以弥补现有技术的不足。

本发明的一个方面涉及一种内切葡聚糖酶，其氨基酸序列为SEQ ID NO: 1。

本发明的一个方面涉及编码内切葡聚糖酶的基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO: 2。

本发明还涉及上述内切葡聚糖酶在纺织领域的应用。

本发明提供了来源于斜卧青霉的新型内切葡聚糖，并将该酶的编码基因转化入毕赤酵母中，构建了高效表达该内切葡聚糖酶的工程菌。摇瓶发酵酶活可达1200U/mL，所产内切葡聚糖酶的最适pH为5.0，最适温度为50℃，在pH4.0-7.0范围内酶活稳定，可广泛应用于纺织加工技术领域，其中在牛仔布起花及除毛方面的应用，除毛干净，起花均匀，花点较小，强力损失小，应用效果显著。

附图说明

图1为毕赤酵母工程菌EG2发酵上清液SDS-PAGE电泳检测分析图，泳道2中箭头所指处的条带即为重组表达的内切葡聚糖酶。

具体实施方式

本发明用到了遗传工程和分子生物学领域使用的常规技术和方法，例如MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, 3nd Ed. (Sambrook, 2001)和CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY (Ausubel, 2003)中所记载的方法。这些一般性参考文献提供了本领域技术人员已知的定义和方法。但是，这并不意味着将本发明限定于所述的任何具体方法、实验方案和试剂，因为它们可以改变。

除非在本文中另作限定，本文所用的全部技术术语和科学术语具有本发明所属领域的普通计数人员通常所理解的相同含义。DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY, 3nd Ed. (Singleton et al., 2006)和COLLINS DICTIONARY BIOLOGY (Hale et al., 2003)为技术人员提供了本发明中所使用的许多术语的一般性解释。

除非另作说明，核酸是按5′至3′方向从左至右书写；氨基酸是按氨基至羧基的方向从左至右书写。

如本文所用，术语“重组”当被用于指代细胞、核酸、蛋白或载体时，表示该细胞、核酸、蛋白或载体已通过导入异源核酸或蛋白或者通过改变天然核酸或蛋白而被修饰。因此，例如，重组细胞是表达在天然(非重组)形式的该细胞中不曾发现的基因，或者表达天然基因。

术语“蛋白质”和“多肽”在本文中可以互换使用。本文使用氨基酸残基的传统的单字母或三字母代码。

如本文所用，术语“基因”指参与生产多肽的DNA片段，包括编码区之前和之后的区域，以及各编码片段(外显子)之间的插入序列(内含子)。

术语“核酸”包括DNA、RNA，单链或双链的，以及它们的化学修饰物。

术语“核酸”和“多核苷酸”在本文中可以互换使用。

术语“载体”指被设计用来将核酸导入一种或多种细胞类型的多核苷酸序列。载体包括克隆载体、表达载体、穿梭载体、质粒、噬菌粒、序列盒以及类似物。

术语“表达载体”表示包含DNA序列的DNA构建物，所述DNA序列被可操纵的连接于能够影响该DNA在合适宿主中表达的合适的控制序列。此类控制序列可以包括完成转录的启动子、可选的控制转录的操纵子序列、编码mRNA上合适的核糖体结合位点的序列、增强子以及控制转录和翻译的终止的序列。