[发明专利]一种复相乳化法制备海藻酸钙微球的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药材料制备领域，具体涉及一种复相乳化法制备海藻酸钙微球的方法。

背景技术

海藻酸是一类无毒、生物相容性好、可生物降解的天然高分子材料，可在温和条件下实现对活性物质的包埋，如药物、细胞及酶等. 传统制备微球的方法多采用注滴法、喷雾法及原位聚合法等，由于制得的微球粒径较大，在一些给药方式上受到了极大的限制。 因此，人们相继把目光转向了可以制备粒径小于500 μm 的微球的静电法和乳化法上.500 μm 的微球的静电法和乳化法上.乳化法有多种分类方式，如按乳化体系可分为单相乳化法和复相乳化法；按乳化方式可以分为机械搅拌乳化法、超声乳化法及膜乳化法等。

传统的乳化法通常需要在较高的搅拌转速(>2000 r/min)或较大的剪切力作用下进行。发现太高的搅拌速度很容易破坏药物分子的生物活性，且难以实现规模化生产；另外，有机溶剂的使用与残留对蛋白类药物的活性也存在一定的影响. 因此，超声乳化和膜乳化法越来越受到人们的重视. 超声乳化是通过超声波产的超声空化作用，将大块的液滴破碎并分散成粒径很小的乳滴(<50 μm)。多年来，研究者一直致力于研究超声乳化过程中各参数对单相乳化体系中微球大小、分布及乳化状态等的影响。也有人将超声与复相乳化结合使用，应用于溶剂蒸发法制备乳酸和脂质体微球。

发明内容

针对上述问题，本发明将超声与复相乳化相结合，采用静电结合法制备载模型药物—BSA 的微球。

本发明一种复相乳化法制备海藻酸钙微球的方法，按照以下步骤进行：

（1）向已混合均匀的ALG 与BSA 溶液中加入一定体积的大豆油，先磁力搅拌10~20 min，再机械搅拌5~10 min，之后边搅拌边加入体积比为2%的Tween85 水溶液，先将乳状液超声乳化5~8 min 后，再继续机械搅拌，形成稳定的水油水复相乳化体系， 最后，向其中缓慢滴入CaCl2 溶液，使最终乳化体系的外水相含Ca²⁺ 质量百分比为10~20%并在500 r/min 下持续搅拌90 min；

（2）用 0.8 μm 的微滤膜过滤上述乳状液，用石油醚和异丙醇洗涤滤饼，洗掉残留的Span85 和Tween85，并使微球进一步脱水、硬化。

载药率和包埋率的测定：取一定质量的微球，放入0.2 mol/L 的柠檬酸钠溶液中，直至微球全部溶解. 释放出微球内的BSA，用考马斯亮蓝检测法测定595 nm 下该溶液的OD 值，计算出溶液中BSA 的浓度，根据下式求出微球的载药率和包埋率：

载药率=包埋的BSA质量/微球质量×100%

包埋率=包埋的BSA质量/加入的 BSA总量×100%

制得的微球对BSA 的包埋率接近70%，载药率也达4%。

采用超声复相乳化法，以色拉油为油相，制备了平均粒径10 μm 左右、表面性能及球形度好、无聚集的海藻酸钙微球.随着ALG 浓度的增大及BSA 质量的增加，微球的包埋率升高、载药率下降、平均粒径增大. 微球的体外释放曲线表明，该系统存在pH 响应特性，尤其在磷酸缓冲液中，被微球包埋的BSA 的释放速率较快，随着搅拌速度的增大，微球的释放速度变快、突释现象增强. 电泳实验结果表明，制备过程未对被包埋药物的分子结构产生影响. 因此，该方法制备的载药微球作为蛋白、多肽类药物在体内的输送载体具有一定的可行性。

本发明将超声与复相乳化相结合，采用静电结合法制备载模型药物—BSA 的微球，以可以代谢并增加药物稳定性的色拉油替换传统的液体石蜡作为油相，节省后续去除油相的成本。制得的微球对BSA 的包埋率接近70%，载药率也达4%。

具体实施方式

实施例1

一种复相乳化法制备海藻酸钙微球的方法，按照以下步骤进行：

（1）向 5 mL 已混合均匀的ALG 与BSA 溶液中加入一定体积的大豆油，先磁力搅拌10 min，再机械搅拌5 min，之后边搅拌边加入150 mL 体积比为2%的Tween85 水溶液，先将乳状液超声乳化5 min 后，再继续机械搅拌，形成稳定的水油水复相乳化体系. 最后，向其中缓慢滴入CaCl2 溶液，使最终乳化体系的外水相含Ca²⁺ 质量百分比为10%并在500 r/min 下持续搅拌90 min；

（2）用 0.8 μm 的微滤膜过滤上述乳状液，用石油醚和异丙醇洗涤滤饼，洗掉残留的Span85 和Tween85，并使微球进一步脱水、硬化。