[发明专利]诱导胚胎干细胞定向分化为角化细胞的培养基及方法有效
| 申请号： | 201310596606.1 | 申请日： | 2013-11-21 |
| 公开（公告）号： | CN104651298B | 公开（公告）日： | 2019-06-04 |
| 发明（设计）人： | 周海文;李晗卿;傅歆;肖苒 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学医学院附属第九人民医院 |
| 主分类号： | C12N5/0735 | 分类号： | C12N5/0735;C12N5/071 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 200011 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 诱导 胚胎 干细胞 定向 化为 角化 细胞 诱导剂 培养基 | ||
【权利要求书】：
1.一种诱导胚胎干细胞定向分化为角化细胞的培养基，其特征在于，所述培养基是将诱导胚胎干细胞定向分化为角化细胞的诱导剂加入到用于胚胎干细胞培养的分化培养基中配制得到的，所述诱导胚胎干细胞定向分化为角化细胞的培养基中含有25ng/mL骨形成蛋白4、1µ M维甲酸和0.3mmol/L抗坏血酸。
2.根据权利要求1所述的诱导胚胎干细胞定向分化为角化细胞的培养基，其特征在于，所述用于胚胎干细胞培养的分化培养基含有体积百分比浓度为1%的N2添加剂、体积百分比浓度为99％的DMEM/F12培养液。
3.一种诱导胚胎干细胞定向分化为角化细胞的方法，其特征在于，采用权利要求1或2所述的诱导胚胎干细胞定向分化为角化细胞的培养基，包括以下步骤：
步骤1，将传代后的胚胎干细胞在权利要求1或2所述的诱导胚胎干细胞定向分化为角化细胞的培养基中贴壁培养5-10日，每日换液。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤1之前，还包括前处理步骤：将胚胎干细胞株在mTeSR1培养基中进行培养，传代。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，还包括后处理步骤：将步骤1处理得到的细胞以中性蛋白酶消化后，接种至I型胶原包被的培养皿中，以角化细胞培养液继续贴壁培养3-6周，隔日换液，在细胞对数生长期传代。
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