[发明专利]一种基于HPLC‑DAD法测定甲磺酸伊马替尼含量及其杂质限度的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于HPLC-DAD法测定甲磺酸伊马替尼含量及其杂质限度的方法。

背景技术

甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)，化学名为4-[(4-甲基–1-哌嗪)甲基]–N-{4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)–2-嘧啶基]氨基]苯基}苯甲酰胺甲磺酸盐，商品名为格列卫，其结构式如下，是瑞士诺华(Novartis)公司研发的酪氨酸激酶抑制剂类药物。其在美国、欧盟和日本等国获得孤稀药物地位，用于治疗α-干扰素(interfereon–alfa)治疗失败胚细胞危象病期、加速病期或慢性骨髓性白血病和胃肠道间质细胞瘤。

从张小顺等人关于伊马替尼分析方法的综述中可见，目前国内外对于甲磺酸伊马替尼的分析方法(HPLC-MS、HPLC-MS-MS、毛细管电泳法、电化学分析方法等)主要集中在血药浓度及生物利用度上，而对于原料药及有关物质的检测多采用离子对试剂辛烷基磺酸钠溶液作为缓冲盐，流动相配制复杂，且离子对试剂和固定相结合产生不可逆吸附，进而影响固定相活性位点，对色谱柱造成不可逆的伤害，会大大缩短色谱柱的使用寿命。离子对试剂对pH值比较敏感，且离子对试剂的浓度与样品的保留时间有直接的影响，配制流动相时要求精确度较高，否则直接影响实验的重复性和重现性。最近，Nageswari.A等人利用超高压液相色谱法测定甲磺酸伊马替尼及其降解产物，但是此法对于仪器要求较高，梯度洗脱程序复杂，且需要特殊的色谱柱(Waters Acquity UPLC BEH C18(50×2.1mm,1.7μm))。目前各国药典均未收载其原料和制剂的标准，进口注册标准（JX20040087）和国内关于伊马替尼分析方法的报道，均采用离子对试剂辛烷基磺酸钠作为缓冲盐。

从现有的专利文献及期刊论文公开的内容来看，目前国内外用于检测伊马替尼的方法主要是液相法和电位滴定法，所用流动相为辛烷基磺酸钠离子对试剂、或多溶剂组合。研究人员发现，辛烷基磺酸钠离子对试剂对色谱柱有影响，减少色谱柱的使用寿命。因此针对现有技术中所存在的技术问题，发明人经过理论分析和实验研究，提供了一种新的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于HPLC-DAD法测定甲磺酸伊马替尼含量及其杂质限度的方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种基于HPLC-DAD法测定甲磺酸伊马替尼含量及其杂质限度的方法，采用C18色谱柱，以甲醇—三乙胺水溶液为流动相，所述三乙胺水溶液的体积百分浓度为0.5%～1%，pH值为7.5～11；梯度洗脱，流速为0.8～1.2mL/min，检测波长为200～400nm；所述梯度洗脱的程序为0～55min，65%→15%三乙胺水溶液。

所述的检测波长优选为268nm。

所述三乙胺水溶液的体积百分浓度优选为0.5%。

所述三乙胺水溶液的pH值优选为8。

所述色谱柱的柱温为25～35℃，进样体积为0.5～20μL。上述柱温优选为30℃，上述进样体积优选为10μL。

所述流速优选为1.0mL/min。

所述的C18色谱柱为Waters X-Terra RP18色谱柱、Welch Materials Xtimate C18色谱柱、Phenomenex Gmini C18色谱柱或Waters X-Bridge C18色谱柱。

本发明技术方案中所述的杂质为甲磺酸伊马替尼工艺合成过程中可能产生的六个杂质及其可降解的产物。其中六个杂质为：杂质A：4-[(哌嗪-1-基)甲基]-N-{4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)嘧啶-2-基]氨基]苯基}苯甲酰胺；杂质B：4-[(4-甲基-1,4-二氧化哌嗪-1-基)甲基]-N-{4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)嘧啶-2-基]氨基]苯基}苯甲酰胺；杂质C：4-[(4-甲基-1-氧化哌嗪-1-基)甲基]-N-{4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)嘧啶-2-基]氨基]苯基}苯甲酰胺；杂质D：4-[(4-甲基-4-氧化哌嗪-1-基)甲基]-N-{4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)嘧啶-2-基]氨基]苯基}苯甲酰胺；杂质E：1,4-双{4-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)嘧啶-2-基]氨基]苯基]氨甲酰基}苄基哌嗪；杂质F：1–[4–甲基哌嗪基]苄甲酰基-{4-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)嘧啶-2-基]氨基]苯基]氨甲酰基}苄基哌嗪。