[发明专利]阴离子表面活性剂耐受性提高的枝孢霉脂肪酶变体

说明书

本发明提供了一种脂肪酶，该脂肪酶具有良好的阴离子表面活性剂耐受性，可作为洗涤剂的酶制剂使用，具有良好的工业应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体说涉及阴离子表面活性剂耐受性提高的枝孢霉脂肪酶变体。

背景技术

脂肪酶(lipase，EC3.1.1.3)是一类特殊的酯键水解酶，广泛存在于动植物和微生物体中。脂肪酶可以催化酯类化合物的水解、醇解、酯化、酯交换以及化合物的合成等反应。其可应用于食品、医药、洗涤剂、纺织、生物柴油、造纸、皮革、化妆品和环境保护等多个工业领域（Hasan F,Ali SA,Hameed A.Industrial applications of microbiallipases.Enzyme Microb.Technol.2006,39:235-251.）。洗涤剂主要应用于餐具和衣物的清洗、漂白、干洗，皮革清洁，隐形眼睛清洗，化妆品和食品加工等工业废物的清理，排气管和抽水马桶有机废物的降解等（Enzymes used in detergents:Lipases）。在低温、弱碱性洗涤环境下，油性污垢难以去除，在洗衣剂和餐具洗涤剂中配入分解油脂的脂肪酶，能得到比较好的去污效果（脂肪酶在洗涤剂中的应用，坂口博修，日用化学工业译丛，1990年第2期，11-14）。

目前商品化的脂肪酶有：诺维信公司的脂肪酶Lipolase，杰能科公司的Lumafast，以及吉斯特-布罗卡德斯公司的Lipomax。三种商品化脂肪酶虽然在洗涤工业上应用较广，但在阴离子和非离子表面活性剂中的耐受性较差。而表面活性剂是洗涤剂中不可缺少的成分，对洗涤过程中污垢的去除起着至关重要的作用，其中阴离子表面活性剂是洗涤剂中的主要成分，因此，现有的这三种商品化脂肪酶在洗涤工业上的应用受到较大限制。

因此，业界急需一种阴离子表面活性剂耐受性好的脂肪酶，以克服上述缺陷，提高脂肪酶在洗涤工业上的应用。

发明内容

本发明的发明人通过突变，获得了一种脂肪酶，该脂肪酶具有良好的阴离子表面活性剂耐受性，可作为洗涤剂的酶制剂使用，具有良好的工业应用前景。

因此，本发明的第一方面在于，提供一种具有脂肪酶活性的多肽。

本发明提供的具有脂肪酶活性的多肽包含突变的SEQ ID No:42所示的氨基酸序列或其活性片段，其中所述突变包括将SEQ ID No:42所示的氨基酸序列的第377位的赖氨酸突变为酸性氨基酸或其酰胺。

在本发明的一个实施方案中，将SEQ ID No:42所示的氨基酸序列的第377位的赖氨酸突变为谷氨酸（E）、天冬氨酸（D）、谷氨酰胺（Q）或天冬酰胺（N），优选突变为谷氨酸（E）或天冬氨酸（D）。

本发明的第二个方面在于，提供编码第一方面的多肽的核酸分子。

本发明的第三个方面在于，提供包含第二方面的核酸分子的载体。

在本发明的一个实施方案中，所述载体为表达载体。

在本发明的一个实施方案中，所述载体被设计用于真核细胞或原核细胞中表达。在本发明的一个实施方案中，所述载体进一步被设计用于细菌细胞、真菌细胞、酵母细胞、哺乳动物细胞、昆虫细胞或植物细胞中表达。

本发明的第四个方面在于，提供包含本发明第二方面的核酸分子或第三方面的载体的细胞。

在本发明的一个实施方案中，所述细胞为真核细胞或原核细胞。在本发明的一个实施方案中，所述细胞为细菌细胞、真菌细胞、酵母细胞、哺乳动物细胞、昆虫细胞或植物细胞。

本发明的第五个方面在于，提供使用本发明第四个方面的细胞产生的脂肪酶。

本发明的第六个方面在于，提供使用本发明第四个方面的细胞产生的脂肪酶酶液。