[发明专利]一种水产品中亚硝酸盐、硝酸盐和多聚磷酸盐同时测定的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及多种无机盐的检测方法，特别涉及水产品中亚硝酸盐、硝酸盐和多聚磷酸盐同时检测的方法。

背景技术

海产品中的硝酸盐在细菌和酶的作用下会还原成亚硝酸盐。一些储存时间较长、有腐败变质倾向且蛋白质含量较高的海产品其所含亚硝酸含量更高。亚硝酸盐可使血液的载氧能力下降，导致高铁血红蛋白症。其与胺类结合可形成亚硝胺，诱发消化系统的癌变。关于亚硝酸盐中毒的事件也时有报道。为控制人体对硝酸和亚硝酸的摄入量，硝酸和亚硝酸被列为食品卫生标准中的重要指标，我国对食品中硝酸和亚硝酸盐提出明确的限量标准。目前，水产品中硝酸盐和亚硝酸盐的测定方法主要有离子色谱法、分光光度法、示波极谱法等，分光光度法、示波极谱法需分步测定硝酸和亚硝酸，且操作繁琐，灵敏度低。离子色谱法可同时检测硝酸盐和亚硝酸盐。

磷酸盐可分为正磷酸盐和缩聚磷酸盐：正磷酸盐指正磷酸（H₃PO₄）的各种盐。正磷酸盐加热脱水缩合形成缩聚磷酸盐,其通式为M_n+2P_nO_3n+1,式中M为一价金属离子，n为磷原子数，当n增大时,磷酸盐稳定性变差。焦磷酸的各种盐称为焦磷酸盐，M₄P₂O₇；三磷酸的各种盐称为三聚磷酸盐，M₅P₃O₁₀；分子含有3个以上的磷原子的缩聚磷酸盐统称为多聚磷酸盐，偏磷酸盐分子式为（MPO₃）n。目前,在水产加工中,多聚磷酸盐主要是指焦磷酸盐、三聚磷酸盐、三偏磷酸盐。多聚磷酸盐是一类性能优异的保水剂和抗冻剂,被许多水产企业大量用于海产品特别是冷冻海产品的加工和保存过程中，用来提高海产品的有效持水能力，并有效延长海产品的货架期,减少解冻后的流滴损失。同时，有研究证明多聚磷酸盐对水产品中的微生物生长有抑制作用。近些年来，有一些不法商贩利用了多聚磷酸盐可以加大水产品吸水性、抑制微生物生长等特点，在商品中人为注水，以次充好，以少充多。但是，人体如过多地摄入磷酸盐，则会降低钙吸收导致肌体钙磷失衡，继而引发疾病,因此各国对水产品中多聚磷酸盐含量作了明确的限量要求。目前，国内还没有检测水产品中多聚磷酸盐含量的国家标准和行业标准。传统检测多聚磷酸盐的方法多用双氧水和硫酸将磷酸盐的多聚体转化为正磷酸盐，然后用离子色谱法进行检测。但是水产品中本身就具有一定含量的正磷酸盐，因此，用这种方法并不能准确的测定多聚磷酸盐的含量。也有一些科研工作者曾尝试不同的前处理方法，对海产品进行提取后用核磁共振法直接检测多聚磷酸盐，但由于设备昂贵，效果也不甚理想。杨敏等人采用离子色谱法测定白菜中的硝酸盐、亚硝酸盐、磷酸盐、及总磷、总氮。但是不能对不同的磷酸盐进行定量。由于生物体本身含有一定的磷酸，因此该方法依旧不能同时测定硝酸盐、亚硝酸盐及多聚磷酸盐。离子色谱法对水产品中污染物及添加剂的测定是目前研究热点，但至今尚未建立一种快速超声辅助提取-固相萃取-离子色谱法（UAE-SPE-IC）同时检测水产品中的硝酸盐、亚硝酸盐和多聚磷酸盐的检测方法。国内已经在申报的相关的发明专利有申请号201210014139.2、申请日2012-01-18公开的一种检测酸腌菜中亚硝酸盐、硝酸盐的方法，但是这些方法实际检测时灵敏度不高，对于同时检测水产品中的硝酸盐、亚硝酸盐和多聚磷酸盐快速检测应用难度较大。

发明内容

本发明提供一种水产品中亚硝酸盐、硝酸盐和多聚磷酸盐同时测定的检测方法，该方法定量分析结果可靠、检测限低、适用于同时测定水产品中硝酸盐、亚硝酸盐和多聚磷酸盐（包括正磷酸盐、焦磷酸盐、三聚磷酸盐和三偏磷酸盐）快速检测。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种水产品中亚硝酸盐、硝酸盐和多聚磷酸盐同时测定的检测方法，该方法包括如下步骤：

a、样品前处理：将待测的水产品样品充分混匀并搅碎，装入容器内，密封、冷藏备用；

b、快速超声辅助提取：准确称取经前处理的水产品样品放于玻璃容器中，加入适量超纯水制成均质系统，封盖后超声波提取；

c、蛋白质沉淀：将超声波提取后的样品倒入离心管中，离心过滤，取滤液与三氟乙酸溶液混合，滤液与三氟乙酸溶液的体积比为20：3-4，0-4℃保存；

d、固相萃取：将蛋白质沉淀后的样品离心，过滤后对滤液采用C18柱进行固相萃取，过柱液经尼龙滤膜过滤后收集于5mL自动进样器样品瓶中，供离子色谱仪测定；

e、离子色谱分析；