[发明专利]一种独活香豆素活性单体及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于一种中药的制备方法，具体是一种中药独活活性单体的制备方法，该单体可用于治疗阿尔茨海默病。 

背景技术：

阿尔茨海默病(Alzheimer disease，AD)又称老年性痴呆，是中老年人常见的神经退行性疾病，主要表现为进行性记忆力减退和认知功能障碍，是当今老年医学面临的最为严峻的课题之一^[1-2]。其发病机制尚不十分清楚，目前普遍认为β淀粉样蛋白(β-Amyloid，Aβ)沉积是病变形成和发展的主要原因。在AD脑内病灶周围聚集着大量活化的小胶质细胞，产生大量炎性介质引起炎症反应，氧化应激过强使自由基大量产生，影响了细胞的代谢与功能，导致以凋亡为主的大量神经元溃变丢失、组织萎缩，其中以基底前脑胆碱能神经元丢失最为严重，引起学习与记忆功能障碍^[2-3]。传统的治疗药物包括改善胆碱能神经功能药、改善脑循环药、抗氧化药及非甾体抗炎药等，都只能部分缓解症状，且副作用较重，病人难以长期服用，因而至今对该病仍无有效治疗方法^[2-3]。 

独活(Radix Angelicae pubescentis)是《中国药典》收载的常用祛风湿散寒药，正品为伞形科植物重齿毛当归的干燥根，主治风寒湿痹、腰膝疼痛等症。纵观历代医家对独活的记载，会发现其除具有祛风散寒的功效外，还具有调补五脏，尤善补肾，祛瘀化痰，宣通脑络之功效，是一味入阴而升阳，通补并用的防治衰老良药。作为祛风除湿类中药之首，独活相当于西医的非甾体类抗炎药，能抑制AD脑内的免疫炎症反应保护神经组织，减轻神经元损伤；同时其通实补虚的功效还能纠正AD肾精亏虚、本虚标实之病机，调节机体的免疫机能，增强抗病能力，因此具有防治AD的中医理论基础。 

现代药理研究已证实独活煎剂或浸膏具有镇静催眠、降压、抑制血小板聚集及抗肿瘤等作用，近年亦有报道独活能减轻AD模型动物脑内炎性反应和氧化应激损伤，抑制细胞凋亡，改善学习与记忆能力等。但以上研究所用制剂仅限于独活水煎剂和醇提物等，其中主要药理活性部位香豆素的含量较低(最高为29.1％)，且对其中化合物指认 不清，治疗效果欠佳^[4-5]。 

已知香豆素类化合物是独活的主要药理活性部位，包括蛇床子素、二氢欧山芹素、二氢欧山芹乙酸乙酯、异欧前胡素等^[6-7]。现有关独活香豆素提取纯化的报道较少，才谦等^[8]用超临界提取工艺纯化得到的独活总香豆素提取物，香豆素含量略大于50％，其操作工艺复杂，设备昂贵，难以推广应用；中国专利200710024862.8“一种独活提取物的制备方法”，采用回流提取和有机溶剂萃取法制备的独活提取物，虽方法工艺简单，但重复此方法所得提取物中香豆素含量不超过30％，且成分不清、难以排除有机溶剂的残留，用于体外细胞实验效果不佳。 

发明内容

本发明的目的，是提供一种独活香豆素活性单体。 

本发明的另一个目的，是提供一种独活香豆素活性单体的制备方法。 

本发明的又一目的，是证明了该单体能治疗阿尔茨海默病。 

采用的技术方案是： 

1、一种独活香豆素活性单体，其特征在于该单体是香豆素中的蛇床子素。 

取纯度99％的香豆素，经LC-MS法检测分析其结构，确定所得化合物为蛇床子素(Osthole)。用于体内、体外药理实验，证实该蛇床子素对阿尔茨海默病细胞模型-Aβ损伤神经元有明显保护作用，且能显著改善APP/PS1双转基因AD模型小鼠的学习与记忆能力，治疗效果明显优于独活水煎剂和醇提物。 

2、一种独活香豆素活性单体的制备方法，包括下述工艺步骤： 

取独活药材粉碎，用95％(体积百分比)乙醇回流提取3次，减压回收95％乙醇，再对浓缩后的提取液依次用石油醚和乙酸乙酯萃取得到萃取液，合并上述萃取液，经减压回收溶剂，制得60℃温度下测相对密度为1.0-1.2的浸膏。对浸膏进行硅胶柱色谱分离，以石油醚∶乙酸乙酯为100∶0→5∶1的混合液梯度洗脱，选取其中10∶1梯度分离得到的无色结晶，即为化合物蛇床子素的结晶。 

本发明的优点： 

用本发明方法制备的结晶的蛇床子素纯度为99.0％以上，提高了 治疗阿尔茨海默病的疗效。 

本发明方法操作简单，工艺成熟，所得蛇床子素量大、纯度高、成本低，因此易于推广，并被广大AD患者接受，具有广阔的临床应用前景和明显的社会经济价值。 

附图说明

图1是HPLC法对蛇床子素纯度检查示意图。