[发明专利]一种双靶点双弹头抗肿瘤融合蛋白、其编码基因和用途

说明书

本发明提供一种抗肿瘤融合蛋白，所述融合蛋白具有以下一级氨基酸序列结构：EGFR特异性靶向寡肽‑连接肽‑力达霉素辅基蛋白‑连接肽‑TRAIL功能肽段；其中，所述EGFR特异性靶向寡肽具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述力达霉素辅基蛋白具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，所述TRAIL功能肽段具有SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。该融合蛋白为靶向EGFR和DR4/DR5的双特异性融合蛋白，其含有靶向EGFR的配体寡肽，通过拮抗EGFR信号通路来增加肿瘤细胞对TRAIL的敏感性，逆转肿瘤细胞对TRAIL的天然耐药性。本发明还提供了该融合蛋白的编码基因、与力达霉素发色团组装的强化融合蛋白以及它们的制药用途。

技术领域

本发明属于药用蛋白技术领域。具体来讲，本发明涉及一种抗肿瘤融合蛋白、其编码基因、以该融合蛋白为活性成分的药物以及其制药用途。

背景技术

TRAIL（TNF-related apoptosis-inducing ligand，肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体）是机体自身合成的一种细胞因子，其生理功能主要是调节机体的免疫反应。TRAIL主要通过细胞外凋亡途径诱导细胞凋亡，但在后期也有线粒体通路的参与。TRAIL信号传导通路是指以TRAIL为配体，通过与死亡受体结合而启动凋亡信号，最终诱导细胞凋亡。研究表明，TRAIL及靶向TRAIL受体的激动剂型抗体能够选择性地诱导肿瘤细胞凋亡，而正常组织并不敏感。

TRAIL对肿瘤细胞具有选择性作用，目前已经发展到Ⅱ期临床试验阶段，并且预示了很好的临床应用前景。大量研究已经表明，TRAIL能诱导各种肿瘤细胞凋亡，如肺癌、乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、胰腺癌、肾癌、中枢神经系统肿瘤、胸腺肿瘤、白血病、多发性骨髓瘤、黑色素瘤、骨肉瘤等。尽管早期的临床实验是很令人鼓舞的，但是人重组表达的TRAIL（Human recombinant TRAIL，hrTRAIL）仅仅局限于携带TRAIL敏感肿瘤的患者，即使同一组织来源的肿瘤，对TRAIL的敏感性也有差异。因此，不同肿瘤组织对TRAIL的不敏感性使TRAIL应用于临床受到限制。然而，研究发现，TRAIL与小分子药物联用后，不但可以克服肿瘤对TRAIL的耐药性，同时还可以增加疗效。

表皮生长因子受体（EGFR）异常表达是多种上皮来源的肿瘤细胞的重要特性，因此EGFR已成为肿瘤靶向性治疗的理想靶点。EGFR过度表达能够拮抗死亡配体TRAIL和CD95L诱导的肿瘤细胞凋亡。如果采用针对EGFR的配体片段融合蛋白拮抗EGFR介导的信号通路，那么就能增强TRAIL的抗肿瘤作用，并能在一定程度上克服肿瘤细胞对TRAIL的耐药性。

力达霉素（LDM）是由1个辅基蛋白（Lidamycin apoprotein，LDP）和1个发色团（active enediyne chromophore,AE）组成的一种烯二炔类抗肿瘤抗生素，可以作为弹头药物。其中，辅基蛋白起保护发色团的作用，由110个氨基酸组成，分子量为10506Da，并且这两个部分可以拆分。研究发现，LDP本身在体内具有中等程度的抗肿瘤作用，并且由于其具有独特的分子结构，可以作为开发新型抗肿瘤药物的支架载体。

基于上述现有技术状况，可以考虑以力达霉素辅基蛋白为支架载体，通过基因工程的方法将TRAIL和EGFR配体寡肽与力达霉素辅基蛋白形成融合蛋白。

发明内容

基于上述技术问题，本发明的一个目的是提供一种以LDP为支架具有靶向EGFR和DR4/DR5的双特异性融合蛋白，该融合蛋白为具有抗肿瘤作用的小分子药用蛋白。

本发明的另一个目的是提供该融合蛋白的编码基因。

由于力达霉素具有可拆分和组装的特性，本发明还提供一种与发色团组装的强化融合蛋白。

本发明的还一个目的是提供以上述融合蛋白为活性成分的药物以及上述融合蛋白的制药用途。

本发明通过以下技术方案实现上述目的：