[发明专利]一种靶向FoxQ1基因的干扰siRNA及其抗非小细胞肺癌的用途

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种靶向FoxQ1基因的干扰siRNA及其抗非小细胞肺癌的用途。 

背景技术

肺癌是当今世界上发生率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，每年世界上约有135万人被诊断为肺癌，近年来，肺癌引起的死亡人数已超过乳腺癌、结直肠癌、胰腺癌等，成为癌症死亡的首要原因。其中非小细胞肺癌(NSCLC)是最常见的肺癌类型，相当多的患者属于对传统治疗无效的难治性肺癌。尽管近年来多学科综合治疗模式的进展使得非小细胞肺癌的治疗效果有了较大的提高，但由于转移和耐药等原因，目前死亡率仍然很高，总的五年生存率仅15％左右。因此迫切需要寻求新的诊断指标和加强综合治疗，探索新的治疗策略及治疗靶点，成为肺癌研究最受关注的领域之一。 

肿瘤的发生发展是一个多阶段、多步骤、多基因参与的病理过程，涉及到原癌基因的激活、抑癌基因的失活以及凋亡相关基因的异常表达，在本质上是一种多基因异常的疾病。RNA干扰(RNA interference，RNAi)是目前日趋发展和逐渐成熟的一门新兴的基因沉默技术，是内源性或外源性双链RNA(double strand ed RNA，dsRNA)在基因的转录后水平上，介导细胞内mRNA发生特异性降解，导致靶基因表达沉默，从而产生相应功能表型的缺失，是特异性抑制具有与dsRNA同源序列的基因的表达的过程，属序列特异性的转录后基因沉默，具有高效性、特异性、位置效应、竞争效应和可传播性的特点。大量研究表明，RNAi是广泛存在于生物界的古老现象，不同的有机体，包括植物、果蝇、线虫及一些哺乳动物细胞中都存在RNAi现象。RNAi在生物进化上是保守的，是生物体抵御病毒或其他外来核酸入侵以及保持自身遗传稳定的保护性机制，是包括人类在内的从低等真核生物到哺乳动物体内天然存在的基因沉默机制，其抑制靶基因表达的效率远比反义核酸高，持续时间也更长。在不影响正常基因功能的前提下，RNA干扰可以抑制某些癌变过程中的重要基因的突变或过量表达，从而达到基因治疗的目的。随着RNA干扰技术的不断完善，针对各种恶性肿瘤的RNAi已经取得了肯定的效果。RNAi现象的发现为基因治疗研究提供了强有力的工具。siRNA 对靶基因的抑制效率明显高于反义核酸，与反义核酸相比，siRNA用量更低，并且克服了反义核酸的一些缺点，如寡聚物的非特异性结合、易降解等。化学合成的siRN能快速转入细胞中并且发生作用，与此同时，化学合成的siRNA费用高，容易降解，仅瞬时表达，且其左右只能持续一周时间。不利于进一步长期稳定的进行机理研究。 

Forkhead(Fox)转录因子家族成员通过招募共激活因子调节基因转录，参与细胞生长、分化、凋亡、迁移等多种生物学过程，其突变和表达异常与发育畸形、代谢性疾病以及肿瘤发生有关。FoxQ1是Fox转录因子家族较新的成员之一，位于人类染色体6p23-25，早期研究发现FoxQ1与毛囊发育及细胞分化有关；现已被证实在人类某些恶性肿瘤发生发展中扮演着非常重要的角色。另外，FoxQ1受转化生长因子-β(transforming growth factor-β1，TGF-β1)诱导上调，参与上皮细胞形态重塑及分化。最新研究发现FoxQ1在肠癌组织中表达显著增高，Kaneda等研究表明FoxQ1调控抑癌基因p21的表达，在肠癌发生、发展中起重要作用。Zhang等报道大多乳腺癌组织高表达FoxQ1，在体外乳腺癌细胞中过表达FoxQ1，可促进细胞增殖和克隆形成，增强癌细胞侵袭力，在体内过表达FoxQ1能促进乳癌细胞肺转移。 

在肺癌的研究中，课题组已在前期实验中证实并于PLOS ONE杂志报道(P MID：22761930；doi：10.1371)，FoxQ1在大多数非小细胞肺癌(NSCLC)组织中呈高表达，并且与肿瘤恶性程度和患者预后密切相关，FoxQ1高表达的患者五年生存率明显低于低表达该基因的患者。因此，运用RNA干扰对NSCLC中Fo xQ1进行抑制，会抑制NSCLC的生长，对NSCLC的生物学特性产生影响。 

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种靶向Fox Q1基因干扰小分子siRNA，使其能够特异性地沉默FoxQ1基因。本发明目的另一目的是提供含有该干扰小分子siRNA的载体。本发明还有一目的是提供该干扰小分子siRNA的应用。