[发明专利]一种与人巨细胞病毒PP65抗原具有特异性的适配子

说明书

技术领域

本发明属于生物医学领域，具体的说，涉及一种与人巨细胞病毒PP65抗原具有特异性的适配子。 

背景技术

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)属于疱疹病毒科乙组疱疹亚科，是一种双螺旋DNA病毒。HCMV呈世界性分布，在人群中广泛传播，病毒长期潜伏于宿主细胞，呈隐性感染。当妊娠，易造成胎儿宫内感染，导致流产、早产、死胎或胎儿先天畸形；当骨髓移植，肝、肾、心脏等器官移植患者免疫功能受损时，潜伏病毒被激活、增值而发生严重感染，将导致患者器官移植失败甚至死亡。近年来，有研究表明巨细胞病毒感染与一些炎症性疾病和增殖性疾病有着密切的关系，包括某些心血管疾病和癌症。现今，巨细胞病毒感染已对人类健康造成极大的威胁，故对HCMV感染的早期诊断显得尤为重要。在HCMV实验检测技术中，病毒分离是检测的金标准，但耗时长，结果受标本保存时间影响大。抗体检测需在患者感染一定时间后才可以检出，受患者自身免疫状态影响较大，且不能区分潜伏感染和活动性感染。抗原血症检测技术是一项快速、敏感的诊断技术，但是传统检测方法多以白细胞为病毒抗原检测载体，限制了其临床应用。而核酸诊断其敏感性与特异性均佳，但检测费用高且核酸提取方法还有待改进。 

SELEX技术，又称指数式富集的配体系统进化(Systematic evolution of ligands byexponential enrichment，SELEX)技术是一种新的组合化学技术，应用大容量的随机寡核苷酸，并结合PCR体外扩增技术，以指数级富集与靶分子特异结合的寡核苷酸，经几轮或数轮的筛选过程，获得高亲和力、高特异性的核酸配基。在实验诊断和临床治疗的分子识别领域，它提供了一个比抗体更快速、灵敏的技术手段。目前，该技术已成功应用于许多靶物质的筛选，包括蛋白、小分子、金属离子，甚至病毒、细菌、细胞等一些复杂靶标，部分核酸适配子已进入临床试验阶段。 

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种与人巨细胞病毒PP65抗原具有特异性的适配子。 

本发明实现目的的技术方案是： 

一种与人巨细胞病毒PP65抗原具有特异性的适配子，其特征在于：它具有SEQ ID No.1～SEQ ID No.6的序列之一。 

SEQ ID No.1～SEQ ID No.6的二级构象依次分别为： 

有益效果：本发明与传统检测技术中的抗体相比，寡核苷酸适配子还具与靶分子结合力更强、稳定性好、精确性高、重复性好、可反复使用、可长期保存、可进行精确的位点修饰、筛选期更短等优势。 

附图说明

图1为本发明人巨细胞病毒PP65抗原适配子与靶物质的亲和性分布图。 

具体实施方式

以下通过人巨细胞病毒PP65抗原适配子筛选的具体操作步骤，对本发明作进一步说明。 

实施例一、构建随机单链DNA(ssDNA)文库和引物 

构建长度为78个碱基的ssDNA文库，两端为固定序列，中间35个核苷酸 为随机序列，其中N代表A，T，C，G中的任意一个，库容量约为10¹⁵-10¹⁶：5’-GGGAGCTCAGAATAAACGCTCAA-N35-TTCGACATGAGGCCCGGATC-3’。上游引物为5’-GGGAGCTCAGAATAAACGCTCAA-3’，下游引物为5′-biotin-(CH2)-TTCGACATGAGGCCCGGATC-3′。随机单链DNA文库和引物可由引物合成公司合成。 

双链DNA(dsDNA)文库的PCR扩增及回收： 

PCR反应体系