[发明专利]一种食品级中性蛋白酶的提纯方法

权利要求书

1.一种食品级中性蛋白酶的提纯方法, 其特征在于包括如下步骤：

1）采用枯草芽孢杆菌 AS1.398菌种进行发酵，得到中性蛋白酶发酵液；然后往发酵液中添加絮凝剂，搅拌均匀，静置30分钟，使杂质与絮凝剂结合成团状； 

2）板框过滤：将絮凝反应完成后的中性蛋白酶发酵液进行板框过滤，过滤压力控制在0.6-0.8MPa，收集滤液;

3）离心：将板框过滤收集的滤液进行高速离心，转速为：10000rpm,进料流速为80L/h，收集离心液;

4）粗滤：将收集的离心液进行粗滤，采用聚偏氟乙烯滤膜进行过滤，聚偏氟乙烯滤膜的孔径为0.22um和0.1um，操作压力0.1MPa；

5）精滤：将经过粗滤后的料液采用聚砜超滤膜进行过滤浓缩，聚砜超滤膜的截留分子量为10K，操作压力0.1MPa；得到中性蛋白酶浓缩液；

6）添加酶活保护剂：往步骤5）得到的中性蛋白酶浓缩液中添加酶活保护剂，搅拌均匀；其中，所述酶活保护剂包括海藻糖和β-环状糊精，所述海藻糖的重量为中性蛋白酶浓缩液的重量的0.4-1.2%，β-环状糊精的重量为中性蛋白酶浓缩液的重量的0.2-0.6%;

7）沉淀:往经过步骤6）处理后的中性蛋白酶浓缩液中添加食用乙醇，边添加边缓慢搅拌，使得中性蛋白酶分子结晶沉淀出来，收集絮状的中性蛋白酶沉淀部分;

8）真空干燥：将步骤7）收集得到的絮状的中性蛋白酶沉淀部分进行真空干燥，即可得到食品级中性蛋白酶。

2.根据权利要求1所述的食品级中性蛋白酶的提纯方法，其特征在于:在步骤1）中，所述絮凝剂是阴离子聚丙烯酰胺；添加絮凝剂时，需先将絮凝剂按重量比为1:1000的比例溶解于水中，得到预溶絮凝液，然后将预溶絮凝液按重量比为1:100的比例添加到中性蛋白酶发酵液中，缓慢搅拌10分钟。

3.根据权利要求1所述的食品级中性蛋白酶的提纯方法，其特征在于:在步骤4）中 ，要求料液经过两次膜过滤，膜孔径分别为0.22um和0.1um，除去杂质和细菌。

4.根据权利要求1所述的食品级中性蛋白酶的提纯方法，其特征在于:在步骤6）中 ，所述海藻糖的重量为中性蛋白酶浓缩液的重量的0.8-1.2%，β-环状糊精的重量为中性蛋白酶浓缩液的重量的0.5%。

5.根据权利要求1所述的食品级中性蛋白酶的提纯方法，其特征在于:在步骤6）中 ，所述海藻糖的重量为中性蛋白酶浓缩液的重量的0.8%，β-环状糊精的重量为中性蛋白酶浓缩液的重量的0.5%。

6.根据权利要求1所述的食品级中性蛋白酶的提纯方法，其特征在于:在步骤7）中，所述食用乙醇的浓度为90%；当添加定量的浓度为90%的食用乙醇后，能够使最终的中性蛋白酶浓缩液中含食用乙醇的重量百分含量为50%。