[发明专利]抑制人免疫细胞TLR2基因表达的siRNA及其应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学与生物医药技术领域，具体是一种抑制人免疫细胞TLR2基因表达的siRNA及其应用。

背景技术

RNA干扰能够简单、有效、特异地下调细胞中基因的表达，作为调节细胞功能的有力工具，其能够直接参与机体细胞功能的调节，为机体细胞特异性基因治疗提供了新的技术手段。而TLR2（Toll-like receptor2）作为一类模式识别受体(Pattern recognition receptor，PRR)，参与生物体天然免疫系统对病原体的识别，在机体通过免疫应答抗病毒感染中发挥重要的作用。目前尚未有针对TLR2设计siRNA来抑制TLR2的表达，以达到治疗某种细菌感染性疾病或病毒性疾病的公开报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抑制人免疫细胞TLR2基因表达的siRNA及其应用，通过设计并合成小分子RNA干扰来抑制人免疫细胞TLR2基因的表达，且设计合成的小分子RNA能够应用于病毒性或细菌感染性疾病的基因治疗中。

本发明实现上述目的所采取的技术方案是：

一种抑制人免疫细胞TLR2基因表达的siRNA，所述的siRNA的正义链序列为5’-CUUGACCUGUCCAACAACAUU-3’，反义链序列为3’-UU GAACUGGACAGGUUGUUGU-5’。

本发明还提供所述的siRNA在抑制人免疫细胞TLR2基因的表达中的应用。

本发明具有的有益效果是：所述的抑制人免疫细胞TLR2基因的表达的siRNA具有重大价值，能够明显地抑制人免疫细胞的TLR2基因的表达，由于TLR2受体介导多种细菌或病毒感染，因此，本发明合成的siRNA能够应用于生物药物制剂，植入细菌或病毒感染的病人，则能够治疗细菌性或病毒性感染疾病，提高人体的免疫力。

附图说明

图1为10×10倍镜下观察到的分化后的人-单核巨噬细胞结构图。

图2为10×20倍镜下观察到的分化后的人-单核巨噬细胞结构图。

图3为10×10倍镜下观察到的人MT4淋巴细胞结构图。

图4为10×20倍镜下观察到的人MT4淋巴细胞结构图。

图5和图6为本发明所述的siRNA转染到分化的人-单核巨噬细胞和人MT4淋巴细胞后，TLR2基因表达的荧光定量曲线图。

图7为TLR2表达扩增后的电泳图。

图8为人-单核巨噬细胞与MT4淋巴细胞转染siRNA后TLR2蛋白的表达图。

图9为人-单核巨噬细胞与MT4淋巴细胞转染siRNA后TLR2/β-actin的灰度比值图。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用到的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

试验材料如下：

siRNA合成：英骏生物技术有限公司。

人-单核巨噬细胞：贴壁生长，从健康人外周血分离单核巨噬细胞，培养7-10天分化成巨噬细胞。

人MT4淋巴细胞：悬浮、成团生长，由中国军科院细胞实验室惠赠。

Lipofectamine2000：购自Invitrogen，Cat No：11668-019。

荧光定量PCR仪:购自美国伯乐公司，Cat No：CFX35。

逆转录试剂盒：TaKaRa公司，Cat No：DDR37

荧光定量试剂盒：TaKaRa公司，Cat No：DDR081

实施例1：siRNA分子的设计与合成

设计体外合成21nt siRNA的方法是：在基因库中寻找TLR2基因的mRNA序列，并从起始密码后的第75位碱基开始寻找AA+N19+UU序列或AA+N19序列，其中N19为任意19nt的mRNA核苷酸序列；然后设计选定序列中的G+C的比例为30％～70％；对确定的序列用Blast搜寻EST基因库，确定所靶向的基因是惟一的；设计21个反义RNA序列，并用化学合成方法合成RNA链。将由21个核苷酸合成的siRNA分别转染人单核巨噬细胞与MT4淋巴细胞，作用于TLR2基因，使这些基因的表达均受到明显的抑制。

设计出的siRNA的正义链序列为5’-CUUGACCUGUCCAACAACA UU-3’，反义链序列为3’-UU GAACUGGACAGGUUGUUGU-5’。