[发明专利]一种可视化生物芯片的检测方法

权利要求书

1.一种可视化生物芯片的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1) 制作生物芯片：将待测物的抗原或抗体或受体和有色偶联物或有色蛋白在PBS缓冲溶液中混合，点样于载体片基的反应区内，再用小牛血清封闭载体基片上没有结合点样物的活性基团；

(2)在上述生物芯片的部分反应孔内分别加入含有不同浓度梯度的检测目标物的混合标准溶液，在剩余反应孔内分别加入待测物溶液，继续向所有反应孔中依次加入检测目标物所对应的单克隆抗体和标记的羊抗鼠IgG，于20~37℃水浴中反应10~20min，洗涤液洗涤；

(3) 所有反应孔内继续加入显色剂，显色反应2~5min后，终止反应；

(4) 反应后终点颜色的深浅可以目视定性判断样品中待测物的含量或者使用仪器进行图像采集，根据检测目标物的灰度值以及标准溶液的浓度对数制作标准曲线，采用外标曲线法定量，分别计算待测物溶液中检测目标物的含量。

2.根据权利要求1所述的一种可视化生物芯片的检测方法，其特征在于：所述的有色蛋白包括血红蛋白，荧光蛋白，血蓝蛋白；

所述的有色偶联物其偶联方法是将有色化合物和蛋白质以共价键形式偶联；

所述的有色化合物包括食用色素或有色染料等有色化合物；

所述的蛋白质为亲水蛋白；

所述的PBS缓冲液的配制：用137 mmol/L氯化钠、2.7 mmol/L氯化钾、10 mmol/L磷酸二氢钠、2 mmol/L磷酸二氢钾配制pH 7.4的PBS缓冲液；

所述的有色蛋白包括血红蛋白。

3.根据权利要求1或2所述的一种可视化生物芯片的检测方法，其特征在于：所述的蛋白质包括牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白、钥孔血蓝蛋白以及多聚赖氨酸。

4.根据权利要求2所述的一种可视化生物芯片的检测方法，其特征在于：所述的偶联方法包括以下几种：含羧基的化合物可用包括碳二亚胺法、混合酸酐法、N -羟基丁二酰亚胺活性酯法的方法；含氨基的化合物可用包括戊二醛法、卤代硝基苯法、二异氰酸酯法、重氮化法的方法；含羟基的化合物可用包括琥珀酸酐法、光气法、卤代羧酸法的方法；含有巯基、醛、酮结构的化合物均可利用相应的双功能团试剂与蛋白偶联的方法。

5.根据权利要求1所述的一种可视化生物芯片的检测方法，其特征在于：所述的羊抗鼠IgG为纳米材料或者生物酶标记，所述的显色剂为生物催化剂及其底物或者化学催化剂及其底物；所述的洗涤液为盐酸缓冲液、磷酸盐缓冲液和Tris缓冲液。

6.根据权利要求1所述的一种可视化生物芯片的检测方法，其特征在于：所述的载体片基为透明的多孔板、高聚物片基、膜、玻片。

7.根据权利要求5所述的一种可视化的生物芯片，其特征在于：所述的多孔板包括24孔板，48孔板，96孔板，384孔板。

8.根据权利要求1所述的基于一种可视化生物芯片的检测方法，其特征在于：所述的待测物为临床样品或动物源性食品，包括血样、牛奶、奶粉、奶酪、饲料、尿液、动物组织、血清、蜂蜜、蜂皇浆、鸡蛋和水产品。

9.权利要求1所述的基于一种可视化生物芯片的检测方法，其特征在于：所述点样物的颜色在检测前后发生变化，检测前为有色偶联物或者有色蛋白呈现的颜色；反应后利用纳米材料或者生物酶催化相应底物显色，呈现另一种颜色；反应后终点颜色的深浅可以目视定性判断样品中待测物的含量，也可以通过仪器测得灰度值，通过计算灰度值得出样品中待测组分的含量。

10.根据权利要求1所述的一种可视化生物芯片的检测方法，其特征在于：所述的待测样品溶液的制备方法为：当待测样品为液体时，取50μL~1mL于10mL EP管中，用缓冲液稀释10~100倍即得待测样品溶液；当待测样品为固体时，取粉碎样品5 g，加入8 mL缓冲液，混合2~5 min，置50 ℃水浴下放置10~30 min，离心5~10 min，取50 μL 上清液，加入450 μL缓冲液混匀，取50 μL ~500μL即得待测样品溶液。