[发明专利]一种用碱裂解大量提取质粒的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生化实验领域，具体涉及一种用碱裂解大量提取质粒的方法。

背景技术

碱裂解法是提取质粒的最常用也最有效的方法，是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异达到分离目的。其利用原理是：高pH使质粒DNA和染色体DNA变性，同时沉淀蛋白质。再将pH值调至中性，质粒DNA较小，很容易复性成双链。而染色体DNA较大，不会复性，缠结成网状不溶物质，从而可以通过离心除去。碱裂解法是较常用的提取的方法。其优点是收获率高，适于多数的菌株，所得产物经纯化后可满足多数的DNA重组操作。  十二烷基磺进行质粒的小量制备。十二烷基磺酸钠（SDS）是一种阴离子表面活性剂，它既能使细菌细胞裂解，又能使一些蛋白质变性。用SDS处理细菌后，会导致细菌细胞破裂，释放出质粒DNA和染色体DNA，两种DNA在强碱环境都会变性。由于质粒和主染色体的拓扑结构不同，变性时前者虽然两条链分离，却仍然缠绕在一起不分开；但后者完全变性分甚至出现断裂，因此，当加入pH4.8的酸性乙酸钾降低溶液pH值，使溶液pH值恢复较低的近中性水平时，质粒的两条小分子单链可迅速复性恢复双链结构，但是主染色体DNA则难以复性。在离心时，大部分主染色体与细胞碎片，杂质等缠绕一起被沉淀，而可溶性的质粒DNA留在上清夜中。再由异丙醇沉淀、乙醇洗涤，可得到纯化的质粒DNA。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于，针对现有技术缺陷，提供一种技术方案：

一种用碱裂解大量提取质粒的方法，步骤如下：首先准备适当的衣藻；将其菌液转移到已经过高温灭菌的离心管中；弃上清；菌体中加入预热的溶液，涡旋振荡，摇晃均匀；静置5-8分钟；用上部将其中的沉淀过滤到新的离心管中；加入2-2.5倍提及的一乙醇胺；混合均匀后再次静置；了乙醇洗涤，沉淀；室温晾干即可。

本发明中，所述衣藻，要求已至其生长中后期，使用前24小时，需要将其置于离心管中，高速离心运转，取其上清，涂膜至琼脂平板，光照23摄氏度的条件下，持续48小时。

本发明中，其中晾干后所得质粒需要加入异丙醇，质量分数为65%。

本发明的有益效果是：操作简单，成本较低，实验条件要求不高，可以用于反复性操作，获得预期效果。

具体实施方式

一种用碱裂解大量提取质粒的方法，步骤如下：首先准备适当的衣藻；将其菌液转移到已经过高温灭菌的离心管中；弃上清；菌体中加入预热的溶液，涡旋振荡，摇晃均匀；静置5-8分钟；用上部将其中的沉淀过滤到新的离心管中；加入2-2.5倍提及的一乙醇胺；混合均匀后再次静置；了乙醇洗涤，沉淀；室温晾干即可。所述衣藻，要求已至其生长中后期，使用前24小时，需要将其置于离心管中，高速离心运转，取其上清，涂膜至琼脂平板，光照23摄氏度的条件下，持续48小时；其中晾干后所得质粒需要加入异丙醇，质量分数为65%。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。