[发明专利]精品肝素钠的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明属于化工领域，涉及一种精品肝素钠的分离纯化方法。

背景技术

肝素是一种广泛存在于哺乳动物组织中的黏多糖，具有抗凝血作用，被广泛用于手术和脑血栓、心肌梗死等的治疗。目前，肝素钠主要是从猪、羊小肠黏膜和牛肺、腌肠衣盐水等中提取。

肝素钠广泛存在于哺乳动物肝、肺、肠黏膜中，多与蛋白质结合成复合体存在。酶解蛋白可分离肝素钠，肝素钠是含硫酸、氨基、醛糖酸的粘多糖。在pH8-9时，带负电荷，可与阴离子交换剂进行离子交换，进行粗分离，多糖液在高浓度乙醇中沉淀进行精纯。肝素钠是血液化学成分测定中最好的抗凝剂。肝素钠是一种含硫酸基团的黏多糖，分子量为1.5万，其抗凝机制是与抗凝酶Ⅱ一起，在低浓度能抑制因子Ⅸa、Ⅷ和PF3之间的作用，并能加强抗凝血酶Ⅲ灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成；还有抑制凝血酶的自我催化及抑制因子X的作用。

目前，国内生产的粗品肝素钠，其中往往含有较多的杂质，纯度较低，产品质量不高，然而粗品肝素钠中这些杂质去除的难度较大，这对后续的进一步纯化成药用肝素钠增加了难度，所获得的药用肝素钠产品往往品质不佳，难以满足要求。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种原料低廉、制备方法温和的肝素锂的制备方法。

为解决以上技术问题，本发明一种精品肝素钠的分离纯化方法，其包括如下步骤：

（1）盐解：

取粗品肝素钠的水溶液，加入NaCl使NaCl的含量为3wt%～5wt%，调整pH值为9～10，于40～45℃盐解2h后，降温至10℃，静置、离心、收集上清液；

（2）吸附与洗脱：

取步骤（1）所得的上清液和预处理的阴离子树脂搅拌2h，过滤，弃滤液；用3wt%NaCl的水溶液洗涤阴离子树脂；再用12%wtNaCl水溶液浸泡阴离子树脂，搅拌1h，过滤，重复上述步骤2次，合并滤液；

（3）乙醇沉淀：取步骤（2）的滤液，加入1～2倍的95％乙醇，充分搅拌后，静置过夜，虹吸上层醇液，真空干燥得肝素钠固体；

（4）一次氧化：取步骤（3）所得的肝素钠固体溶解后，加入0.1wt%～1wt%的高锰酸钾，调整滤液pH值为8.0～9.0，加热至60～80℃，氧化脱色2～5h；

（5）二次氧化：再加入1wt%～3wt%的30%过氧化氢，预冷至5～10℃，调整滤液pH值为8.5～9.5，氧化脱色8～12h后过滤；

（6）沉淀：

取步骤（5）的滤液，加入1～3倍的95％乙醇，充分搅拌后，静置过夜，虹吸上层醇液，真空干燥，得肝素钠精品。

在上述技术方案的基础上，步骤（2）所述的阴离子树脂为D-254树脂。

上述步骤（2）的吸附和洗脱时的搅拌速度为50r/min～60r/min。

与现有技术相比，本发明具有的有益效果为：

本发明通过二步氧化法对粗品肝素钠进行纯化，不仅降低了生产成本，制备无需特别设备，而且制备的肝素钠精品纯度好，回收率高，保证了肝素钠的质量和活性。

具体实施方式

为便于理解本发明，本发明列举实施例如下。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅用于帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。

如无具体说明，本发明的各种原料均可以通过市售得到；或根据本领域的常规方法制备得到。除非另有定义或说明，本文中所使用的所有专业与科学用语与本领域技术熟练入员所熟悉的意义相同。此外任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。

除非另有定义或说明，本文中所使用的所有专业与科学用语与本领域技术熟练人员所熟悉的意义相同。此外任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。

实施例1

一种精品肝素钠的分离纯化方法，其包括如下步骤：

（1）盐解：

取粗品肝素钠的水溶液，加入NaCl使NaCl的含量为4wt%，调整pH值为9～10，于40℃盐解2h后，降温至10℃，静置、离心、收集上清液；

（2）吸附与洗脱：

取步骤（1）所得的上清液和预处理的D-254阴离子树脂搅拌2h，搅拌速度为60r/min，过滤，弃滤液；用3wt%NaCl的水溶液洗涤阴离子树脂；再用12%wtNaCl水溶液浸泡阴离子树脂，搅拌1h，过滤，重复上述步骤2次，合并滤液；

（3）乙醇沉淀：取步骤（2）的滤液，加入2倍的95％乙醇，充分搅拌后，静置过夜，虹吸上层醇液，真空干燥得肝素钠固体；