[发明专利]一种进行蛋白印迹的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种实验方法，具体来说，一种进行蛋白印迹的方法。

背景技术

蛋白质印迹法即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简单，原理如下（二抗用HRP标记）：反应底物为过氧化物+鲁米诺，如遇到HRP，即发光，可使胶片曝光，就可洗出条带。

发明内容

为克服上述技术问题，我们提出了以下技术方案：

一种进行蛋白印迹的方法，步骤如下：首先将需要做印迹的对象在颈动脉进行取血，血液在室温下静置2-3小时，随后在放到冷藏冰箱中，12小时后进行离心；取30ul血清做电泳；将凝胶中具有目的蛋白的部分切下部分，按照上一步凝胶后的大小裁剪，使用百分之80-90的甲醇润湿，激活1-2分；在转印上覆盖薄膜；赶走薄膜上的气泡；室温下摇动15分；然后将其加入封闭液以及抗溶液；取出来，在暗房中进行X光，暗盒内压片4分钟，取出胶片；用纯净水洗净即可。

本发明中，封闭液为5%脱脂奶粉。

本发明中，抗溶液需要进行洗膜三到四次。  

本发明的有益效果是，与预期的结果一致，可以证明重组蛋白表达成果。

具体实施方式

一种进行蛋白印迹的方法，步骤如下：首先将需要做印迹的对象在颈动脉进行取血，血液在室温下静置2小时，随后在放到冷藏冰箱中，12小时后进行离心；取30ul血清做电泳；将凝胶中具有目的蛋白的部分切下部分，按照上一步凝胶后的大小裁剪，使用百分之85的甲醇润湿，激活1-2分；在转印上覆盖薄膜；赶走薄膜上的气泡；室温下摇动15分；然后将其加入封闭液以及抗溶液；取出来，在暗房中进行X光，暗盒内压片4分钟，取出胶片；用纯净水洗净即可，封闭液为5%脱脂奶粉，抗溶液需要进行洗膜三次。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。