[发明专利]一种快速灵敏测定多巴胺的方法

说明书

技术领域

基于电化学发光技术，本发明涉及一种快速、灵敏检测多巴胺的方法，属于电化学检测技术领域。

 

背景技术

多巴胺是大脑神经系统释放的一种神经递质，在大脑技能方面起着非常重要的作用，其非正常流失会引发帕金森等疾病，因此准确测定多巴胺的浓度一直是生物分析中的一项重要任务。目前已经发展了多种多巴胺的检测方法如荧光法、色谱法、电化学法和毛细管电泳法等，其中电化学修饰电极法因具有灵敏度高、速度快、操作简便等优点，在诸多的测定技术中脱颖而出。

电化学发光（ECL），是电化学与化学发光结合的产物，由于其可控性好、灵敏度高、选择性好、仪器简单等优点已成功应用于环境科学、生命科学和材料科学等领域，并引起了人们的高度关注。

 

发明内容

技术问题：本发明旨在发明一种集可控性好、灵敏度高、操作简单等优点为一体的电化学发光传感器应用于多巴胺的检测分析，提供一种制备工艺简单且灵敏度较高的定量检测多巴胺的方法。

技术方案：首先采用滴涂法将一定量的金纳米粒子修饰还原氧化石墨烯（Au NPs-RGO）修饰于玻碳电极表面；基于Au NPs-RGO对过硫酸盐电化学发光（ECL）的协同增强效应，实现信号放大；通过对不同浓度的多巴胺标准品进行ECL检测，建立ECL强度与多巴胺浓度之间的关系，以达到对含多巴胺的样品进行定量检测的目的。

 

具体的技术解决方案如下：

（1）玻碳电极表面预处理：

玻碳电极（GCE，Φ = 3.0 mm）使用前，首先在金相砂纸上打磨，然后分别用1.0 μm，0.3 μm Al₂O₃抛光粉在抛光布上抛光，再用二次水冲洗干净后分别在0.1 M HCl、0.1 M NaOH和无水乙醇中超声清洗一分钟，最后用二次水超声清洗一分钟，室温下晾干备用。

（2）ECL传感界面的构建：

取1.0 mg Au NPs-RGO超声分散在DMF中，形成2.0 mgmL^?1的悬浮液，然后将6.0 μL该悬浮液滴涂于预先处理好的玻碳电极表面，于室温下干燥，即得到Au NPs-RGO修饰玻碳电极（记为Au NPs-RGO/GCE）。

（3）Au NPs-RGO对过硫酸盐ECL的信号放大：

在含有0.05 M K₂S₂O₈的0.1 M PBS，pH7.4，缓冲体系中，以Au NPs-RGO/GCE为工作电极，Pt丝为对电极，饱和KCl溶液填充的Ag/AgCl为参比电极进行ECL测试；

（4）对多巴胺标准品进行检测，建立标准曲线：

以Au NPs-RGO/GCE为工作电极，向含有0.05 M K₂S₂O₈的0.1 M pH7.4 的PBS缓冲体系中加入不同浓度多巴胺，得到相应的ECL信号，多巴胺浓度依次为0.02 μM、0.1 μM、0.5 μM、1 μM、5 μM、10 μM、20 μM和40 μM。以ECL强度的对数值和不同多巴胺浓度的对数值绘制标准曲线，得到最佳线性范围。

有益效果：

1、本发明基于Au NPs-RGO对过硫酸盐ECL的协同增强效应，实现信号放大，为ECL传感器的构建提供了平台；

2、本发明所提出的ECL技术，成功实现了对多巴胺的灵敏检测，在0.02 ~ 40 μM浓度区间内，多巴胺浓度的对数与ECL强度的对数值呈现良好的线性关系，检出限可达6.7 nM；

3、本发明实现了ECL检测多巴胺的目的，该方法所需样品少，检测时间短，且灵敏度较高，适用于实际样品中多巴胺的检测分析。

附图说明

图 1（A）为ECL传感器对不同浓度多巴胺的ECL响应；（B）为ECL传感器应用于多巴胺检测的校正曲线。

 

具体实施方式

实施例一：

ECL传感界面的构建