[发明专利]纤维素酶在饲料原料中的最适添加量配方

权利要求书

1.一种确定纤维素酶在饲料原料中最适添加量的方法，包括如下步骤：

（1）得出每千克饲料原料中纤维素的量；

（2）测量纤维素酶的酶活，所述纤维素酶的酶活定义为在37℃ pH为5.5的条件下，每分钟内从过量底物中降解释放1μmol还原糖所需的酶量定义为1个酶活力单位，1U；

所述底物为步骤（1）所述的饲料原料；

（3）根据步骤（2）所得的酶活，及下述公式，计算出每克步骤（1）中所述饲料原料所需纤维素酶的量，即为理论添加量；

Q＝(C×1 U×1min)/(1μmol×M×120min)

式中：

Q——酶的理论添加量，U/g；

C——每千克步骤（1）所述饲料原料中纤维素的量，g/kg；

M——葡萄糖的摩尔质量，180g/mol；

120min——酶的作用时间；

1U,1min,1μmol——酶活定义参数；

（4）以步骤（3）所得酶的理论添加量为基数，记作Q；n为Q的倍数，以n×Q组成该酶的梯度添加量，其中n为1/2、1/4、1/6、1/8、1/10、1/20、1、2、4、6、8、10、20；

（5）进行体外酶解实验，体外酶解实验的体系如下：

1）将2g饲料原料加入15.0mL pH3.0的0.2mol/L乙酸-乙酸钠缓冲溶液中，再加入0.5mL浓度为70mg/mL的胃蛋白酶溶液，混匀，得食糜液；胃蛋白酶溶液中溶剂为0.01mol/L盐酸水溶液；

2）用1.0mol/L盐酸水溶液调节食糜液的pH值至3.0；

3）将食糜液混合均匀后置于40℃振荡消化，消化75分钟；

4）用1.0mol/L氢氧化钠水溶液调整步骤3）所得消化液的pH值至6.3，然后加入50mg胰酶；

5）实验分两组，第一组称作加酶组，即向步骤4）所得体系中加入纤维素酶，所述酶的添加量为步骤（4）所设的梯度添加量；第二组称作不加酶组，即向步骤4）所得体系中加入2.0mL 0.2mol/L pH6.3的乙酸-乙酸钠缓冲溶液；然后，第一组和第二组均置于40℃振荡消化，消化时间为120min；

（6）还原糖测定，分别检测加酶组和不加酶组的还原糖的浓度，分别记作Ye和Y₀，单位为mg/mL；

（7）按照如下公式计算纤维素酶酶解产生的还原糖占饲料原料的质量百分含量：

ΔM=(((Ye-Y₀)×D×V)/m)×100

ΔM——酶解产生的还原糖占所加饲料原料的质量百分含量，%；

D——测定液稀释倍数，等于1mL除以还原糖测定时离心上清液吸取量；

V——消化反应体系总体积，27mL；

m——消化反应称取饲料原料样品的质量，2000mg；

100——百分比换算系数；

（8）以n为横坐标，以对应的ΔM为纵坐标作图，得到曲线的拐点，并取拐点前两组和拐点后两组的n值；

（9）将步骤（8）得到的n对应的组之间进行ΔM差异分析，按照步骤（8）的n由小到大的顺序，得到与步骤（8）的n最小的一组有显著差异的第一组，纤维素酶在该组饲料中的添加量就是纤维素酶在所述饲料原料中的最适添加量；

所述酶为纤维素酶；

所述还原糖为葡萄糖。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述还原糖测定步骤如下：

（1）取出透析管，将消化液离心5min（5000r/min），取一定量上清液，用水定容至2.0mL，加3.0mL DNS煮沸显色，以水为空白调零，540nm测量加酶组和不加酶组的吸光值，分别记作Xe和X₀；

（2）用DNS法绘制葡萄糖标准曲线，以葡萄糖含量（mg）为Y轴、吸光度OD值为X轴，绘制标准曲线，得到公式Y=aX+b；

（3）分别将Xe和X₀代入（2）的公式，计算加酶组和不加酶组的还原糖的浓度，分别记作Ye和Y₀，单位换算为mg/mL；

所述还原糖为葡萄糖。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述饲料原料为玉米、豆粕、小麦、麸皮、米糠粕、菜粕、棉粕和DDGS中任意一种。

4.一种饲料，由饲料原料和纤维素酶组成。