[发明专利]一种亲和沉淀介质的合成方法及其制备依诺肝素钠的应用

说明书

技术领域

本发明涉及依诺肝素钠的制备方法，更具体的说，本发明涉及一种亲和沉淀介质的制备及其在依诺肝素钠制备中的应用。

背景技术

肝素（Heparin）是一种广泛存在于人和哺乳动物组织中的具有天然抗凝血活性酸性黏多糖。肝素作为抗凝血药物已经在临床上使用了近百年，到目前为止仍是最重要的抗凝血和抗血栓药物之一，是防治深层静脉血栓形成等栓塞性疾病的首选药物。此外，肝素还具有抗病毒、抗炎、抗过敏、抗癌、降血脂等多种生物学功能。肝素在长期使用的过程中，产生了不可预见的副作用，易导致出血、血小板减少、骨质疏松等副作用。为了减少肝素的副作用，二十世纪八十年代末研发了低分子肝素。

依诺肝素钠（Enoxaparin sodium）是低分子肝素的一种，欧洲药典（EP）7.0版对依诺肝素钠定义为：它是通过对猪肠黏膜肝素的苄基酯衍生物进行碱解聚而获得的。EP7.0规定依诺肝素钠的重均分子量为3800-5000道尔顿，特征值约为4500，分子量大于8000的组分不超过18%、分子量2000～8000的组分为68%～82%、分子量小于2000的组分为12%～20%。按干燥品计算，抗Ⅹa因子效价为95-120IU/mg，抗Ⅱa因子效价为20～35IU/mg。抗Ⅹa因子效价与抗Ⅱa因子效价的比值为3.3～5.3。

依诺肝素钠主要用于抗血栓、抗凝血、预防深静脉血栓及肺栓塞、治疗不稳定心绞痛和非Q波心梗等。其主要的作用机制是通过与抗凝血酶Ⅲ结合，经依诺肝素钠结合的抗凝血酶Ⅲ结合凝血酶和FⅩa的能力增强，因依诺肝素钠分子链较短，对凝血酶的抑制作用较弱，而对抗FⅩa的作用较强，能抑制凝血酶的激活，还能抑制血小板聚集，减少暂时性血小板凝块转变成永久性血小板血纤维蛋白凝块的发生机率，改变血液的流动性，降低血液黏度，维持血液正常的流动。与其他低分子量肝素相比，依诺肝素钠具有皮下注射吸收好、半衰期长、生物利用度高、副反应少，剂量易于确定，不需要实验室监测等诸多优点，颇受临床医生和广大患者的青睐，临床应用的适应症不断扩大。目前其全球市场占有率达低分子肝素的60%以上。

目前世界上生产依诺肝素钠的工艺为肝素苄基酯的碱裂解法。美国专利US005389618A公布了依诺肝素钠的基本制备过程：肝素季铵盐的制备，肝素苄基酯的制备，对肝素苄基酯进行碱解聚等工艺步骤。CN102050888B公开了一种依诺肝素钠的制备方法，其采用亲水液相反应和疏水液相反应以及固相反应，将大分子肝素钠降解为具有特定结构的低分子肝素钠。CN100436483C公开了一种依诺肝素钠的纯化方法，其在水媒介中用长链季铵盐盐化肝素，经氯苄酯化后在碱性条件下解聚得到依诺肝素粗品，经活性炭和大孔吸附树脂脱色后得到依诺肝素成品。

然而，其一，上述专利公开的制备工艺中有机溶剂使用量大，对环境有严重的危害；其二，上述专利中几乎没有提及对原料中肝素钠的结构类似物硫酸皮肤素和多硫酸软骨素等杂质的去除方法，肝素中杂质的存在会对后续的肝素的解聚顺序等制备过程及依诺肝素钠精品的分子量分布产生直接的影响。

 

发明内容

本发明的目的是为了改进现有技术的不足，提供一种降低生产成本，提高产品质量，工艺稳定可控的依诺肝素钠制备方法。

本发明的目的是这样来实现的，其方法步骤为：

（1)亲和沉淀介质的合成

本亲和沉淀介质以甲基丙烯酸和甲基丙烯酸甲酯组成的pH敏感型聚合物为基质[其中基质优选Eudragit S-100（简称ES-100）或聚丙烯酸树脂Ⅲ号]，以凝血酶、抗凝血酶Ⅲ或鱼精蛋白为配基；

具体操作步骤为：称取一定量的基质，加入适量N,N-二甲基甲酰胺搅拌使其溶解,将ES-100溶液加入反应器中，底部通氮气搅拌,然后加入N,N-二异丙基碳二亚胺、1-羟基苯并三唑使ES-100活化3～5分钟；活化完成后加入配基偶联反应2.5～3.0小时；偶联反应完成后，用8mol/L醋酸调节反应液pH值至3.5～4.5，反应产物完全析出后抽掉反应液，沉淀用0.1mol/L，pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲液洗涤3次，抽去缓冲液即得亲和沉淀介质。

（2)亲和沉淀介质纯化肝素钠粗品