[发明专利]采用免疫磁纳米粒子和SPR技术相结合检测溴氰菊酯的方法有效
申请号: | 201310460621.3 | 申请日: | 2013-09-30 |
公开(公告)号: | CN103472219A | 公开(公告)日: | 2013-12-25 |
发明(设计)人: | 刘霞;李文进;李蕾;毛璐刚;杨阳 | 申请(专利权)人: | 湖南农业大学 |
主分类号: | G01N33/53 | 分类号: | G01N33/53;G01N21/55 |
代理公司: | 长沙正奇专利事务所有限责任公司 43113 | 代理人: | 何为;袁颖华 |
地址: | 410128 湖南*** | 国省代码: | 湖南;43 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 采用 免疫 纳米 粒子 spr 技术 相结合 检测 溴氰菊酯 方法 | ||
1.一种采用免疫磁纳米粒子和SPR技术相结合检测溴氰菊酯的方法,其特征在于,该方法是将免疫磁纳米粒子加入到含溴氰菊酯的待测样品溶液中,使免疫磁纳米粒子与溴氰菊酯发生特异性结合,经外加磁场分离后得到结合物,将该结合物直接注入经壳聚糖修饰的SPR芯片表面,以检测出待测样品溶液中的溴氰菊酯含量。
2.如权利要求1所述的采用免疫磁纳米粒子和SPR技术相结合检测溴氰菊酯的方法,其特征在于,所述免疫磁纳米粒子是取200μL1.9-3.8mM的羧基化磁纳米粒子溶液,加入0.4M的EDC和0.1M的NHS混合溶液共400μL,漩涡震荡5-10min,冰浴超声5-10min后,再加入200μL0.27-0.55mg/mL溴氰菊酯单克隆抗体溶液,漩涡震荡5-10min,冰浴超声5-10min,加入0.1M乙醇胺200μL,漩涡震荡5-10min,静置15-20min,经外加磁场分离后,用PBS缓冲液清洗并定容至200μL,得到。
3.如权利要求1所述的采用免疫磁纳米粒子和SPR技术相结合检测溴氰菊酯的方法,其特征在于,所述溴氰菊酯单克隆抗体溶液是取3.3mg溴氰菊酯单克隆抗体加入PBS缓冲液1ml配制成3.3mg/mL的母液,再用PBS缓冲液稀释而成。
4.如权利要求1所述的采用免疫磁纳米粒子和SPR技术相结合检测溴氰菊酯的方法,其特征在于,所述经壳聚糖修饰的SPR芯片是将SPR芯片在无水乙醇中浸泡3-8min,经纯水冲洗,氮气吹干后,用氢火焰灼烧15-30s,冷却后装入SPR仪器,待基线走平后,以10-20μL/min的流速通入50-100μL0.4mg/mL的巯基乙胺溶液,再以10-20μL/min的流速通入50-100μL1.2-1.8mg/mL的壳聚糖醋酸溶液,使该壳聚糖醋酸溶液在SPR芯片表面进行自组装制得。
5.如权利要求4所述的壳聚糖修饰的SPR芯片,其特征在于,所述壳聚糖醋酸溶液是取200mg壳聚糖溶于pH值为3.6的50mL50mM醋酸-醋酸钠缓冲液中,60℃磁力搅拌2-4h,冷却后,再用pH值为3.6的50mM的醋酸-醋酸钠缓冲液稀释而成。
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