[发明专利]Sarcaboside A在治疗登革病毒感染药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，更具体涉及一种Sarcaboside A在制备治疗或预防登革病毒感染药物中的应用。

背景技术

登革病毒（Dengue virus，DENV）能够引起登革热，其通过伊蚊传播，严重感染者出现登革出血热和登革休克综合症，病死率极高。该病毒有四个血清型，血清2型是流行病株。本病主要在东南亚，太平洋地区和美洲的热带和亚热带国家中流行。中国广东省，海南省，广西省曾经有14次不同规模的登革热流行。中国登革热的主要传播媒介是埃及伊蚊和白蚊伊蚊。前者分布于南方沿海地区，后者则在南北地区广泛存在南北地区。有报道显示已经从蚊子体内分离到登革病毒。但是，目前在临床上还没有有效的治疗药物。

因此，我们应该高度重视对登革病毒的研究，加强对其的科研力度，做好相关知识和药物的储备，为我国在防控登革病毒感染的方面做出一定的贡献。

本发明涉及的化合物Sarcaboside A是一个2012年发表（Li, X. et al., 2012. Two New-Skeleton Compounds from Sarcandra glabra. Helvetica Chimica Acta 95 (6), 998-1002.）的新骨架化合物，该化合物拥有全新的骨架类型，目前没有关于活性的报道，对于本发明涉及的Sarcaboside A在制备治疗或预防登革病毒感染药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于登革病毒抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于登革病毒感染的防治显然具有显著的进步。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种Sarcaboside A在作为制备治疗或预防登革病毒感染药物中的应用，Sarcaboside A在10.0uM浓度下对DENV的抑郁率为95.95%。而Sarcaboside A在浓度为100uM条件下，Vero细胞的存活率为92.0%。Sarcaboside A能够有效地抑制登革病毒的增殖，但是对细胞毒性很小，可进一步开发为治疗登革病毒感染疾病的药物，具有广泛的应用前景。

所述化合物Sarcaboside A结构如式（Ⅰ）所示：

本发明涉及的Sarcaboside A在制备治疗或预防登革病毒感染药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于登革病毒抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于登革病毒感染的防治显然具有显著的进步。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

1、Sarcaboside A对Vero细胞的毒性实验：

Vero细胞是DENV的易感细胞。因此，本实验首先检测Sarcaboside A对Vero细胞的细胞毒性，以不同浓度的Sarcaboside A作用于Vero细胞，来了解在细胞存活率为90%以上的Sarcaboside A的最大使用浓度，为后续的Sarcaboside A对DENV的抑制作用实验提供参考数据。

2、Sarcaboside A对DENV的抑制实验：

以不同浓度的Sarcaboside A作用于已经感染了DENV的Vero细胞，来获得Sarcaboside A对病毒的抑制效率。本实验中的Sarcaboside A的使用浓度均在使Vero细胞在90%以上存活率的浓度的范围内，因此，可以排除Sarcaboside A的浓度过高而对实验数据的分析产生影响。

Sarcaboside A在治疗或预防登革病毒感染药物中的（抑制）应用，其基本过程是：

A. Sarcaboside A对Vero细胞的毒性实验：

Vero细胞（非洲绿猴肾细胞）是DENV的易感细胞。实验中的Vero细胞购买于中国科学院上海生科院细胞资料中心；MTT试剂盒购于碧云天生物技术研究所；胎牛血清（Fetal  Bovine Serum，FBS）购买于美国GIBCO公司；细胞培养板购买于德国Greiner bioone公司；DMEM培养基和MEM培养基购买于美国GIBCO公司。

实验步骤如下：

1：接种Vero细胞：用含10%（v/v）胎牛血清的DMEM培养基配成单个细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种到96孔细胞培养板，每孔接种体积100ul；