[发明专利]一种从城市富营养化蓝藻水华水体中提取蓝藻毒素的方法

权利要求书

1.一种从水体中提取蓝藻毒素的方法，包括如下步骤：

（1）取待提取水体，向其中加入甲醇和冰醋酸，使甲醇的终体积含量为40%，使冰醋酸的终体积含量为3-5%，300赫兹连续超声15-20min；

（2）将步骤（1）超声处理后的水样调节pH为3，用0.45μm滤膜过滤，滤液于6500g离心5-10min，取上清；

（3）将步骤（2）所得上清过固相萃取柱，用体积含量为40%的甲醇水溶液淋洗，再用体积含量为95%的甲醇水溶液洗脱，得到含有蓝藻毒素的洗脱液；

（4）从步骤（3）的洗脱液中获得蓝藻毒素。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在上述方法中，步骤（1）为如下（I）或（II）：

（I）向待提取水体中加入甲醇和冰醋酸，使甲醇的终体积含量为40%，使冰醋酸的终体积含量为3%，300赫兹连续超声15min；

（II）向待提取水体中加入甲醇和冰醋酸，使甲醇的终体积含量为40%，使冰醋酸的终体积含量为5%，300赫兹连续超声20min。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，在所述向待提取水体中加入甲醇和冰醋酸之前，还包括如下步骤：将所述待提取水体过100目网筛，将过筛后水样用500g离心去沉淀。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：步骤（3）中，所述固相萃取柱为C₁₈固相萃取柱。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述C₁₈固相萃取柱为Cleanert C₁₈-SPE层析柱。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：在步骤（4）中，所述从步骤（3）的洗脱液中获得蓝藻毒素的方法包括如下（a）和（b）的步骤：

（a）将所述洗脱液浓缩，得到蓝藻毒素的浓缩液，所述浓缩液中的溶剂为甲醇；

（b）用高效液相色谱仪串联质谱仪对步骤（a）所得浓缩液进行鉴定与分离，从所述浓缩液中分别得到所述RR型蓝藻毒素和所述LR型蓝藻毒素。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：进行所述步骤（b）时，采用的高效液相色谱条件如下：色谱柱为C₁₈色谱柱；流动相为如下流动相A和流动相B，采用所述流动相A和所述流动相B进行梯度洗脱；流动相A：甲醇；流动相B：体积百分含量为0.1%的甲酸水溶液；所述梯度洗脱为：0～3min，所述流动相中所述流动相A和所述流动相B的体积比从30：70线性变化到75：25；4～8min，所述流动相中所述流动相A和所述流动相B的体积比为75：25；9～12min，所述流动相中所述流动相A和所述流动相B的体积比从75：25线性变化到30：70；

进行所述步骤（b）时，采用的质谱条件如下：正离子电离方式；喷雾电压为5kV；离子化温度为500℃；源内气体1为N₂、压力为55kPa；源内气体2为N₂、压力为55kPa；扫描方式为选择离子模式，选择质荷比为519.8或995.6；碰撞气压力为Medium级；碰撞电压为35V或50V。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述高效液相色谱条件中，流速为0.8ml/min，上样体积为5-10μL，柱温为30℃。

9.根据权利要求6-8中任一所述的方法，其特征在于：所述步骤（b）为：采用权利要求7或8中所述的色谱条件和质谱条件对所述浓缩液进行检测，收集保留时间为5.14min的洗脱峰，从而实现从所述浓缩液中分离得到所述RR型蓝藻毒素；收集保留时间为5.76min的洗脱峰，从而实现从所述浓缩液中分离得到所述LR型蓝藻毒素。

10.根据权利要求1-9中任一所述的方法，其特征在于：所述待提取水体为蓝藻水华水体。