[发明专利]HPLC法分析蛹虫草子实体和残基中有效物含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及到分析化学领域，特别涉及一种用HPLC法分析蛹虫草子实体和其固体培养残基中腺苷和虫草素含量的方法，该方法特别适用于分析人工培养蛹虫草子实体和其固体培养残基。

背景技术

蛹虫草(又名北虫草、北冬虫夏草)子实体为麦角菌科虫草属真菌蛹草菌(Cordyceps militaris(L.)Link)的干燥子座，是我国特有的名贵药用真菌，具有扩张器官、镇静、抗心律失常、降血压、抗病原微生物、抗恶性肿瘤等多种药理活性。腺苷、虫草素等核苷类成分被作为虫草质量的主要参考指标。腺苷(C₁₀H₁₃N₅O₄)全称腺嘌呤核苷，是核酸的基本结构单位，它具有参与人体代谢和生理调节的功能。虫草素(C₁₀H₁₃N₅O₃)又称虫草菌素、3＇-脱氧腺苷，具有抗菌、消炎、抗氧化、抗肿瘤、调节人体内分泌等作用。

目前蛹虫草的人工培植技术主要有液体发酵方式和以大米为基质的固体培养方式等，目前由于固体培养方式所需投资较小，简便易行，目前已在国内许多地区应用。对于固体培养过程中的附属产物-富含菌丝体的固体培养残基，目前还没有对其进行系统的开发利用，仍当作废物扔弃，造成资源的浪费，而蛹虫草在培植过程中固体培养残基是干子实体量的3~3.5倍，在蛹虫草子实体被采收后，仍有大量含有腺苷与虫草素等有效成分的菌丝残留在其中，因此对其进行开发研究是非常有必要的。

蛹虫草作为一种药食两用的真菌，因品种产地，培养条件等原因，其中所含有效成分不尽相同。而蛹虫草的固体培养残基有大量菌丝残留且成分复杂，其有效成分也有很大差异。蛹虫草中腺苷和虫草素的含量测定是虫草产品质量控制及代谢途径研究的前提。目前，蛹虫草及其固体培养残基中腺苷和虫草素的含量测定还没有统一的国标方法，因此确立一个简便可靠的方法一次性进样同时分析子实体与其固体培养残基中的腺苷和虫草素的含量具有现实意义。

发明内容

本发明提供一种HPLC法分析蛹虫草子实体和其固体培养残基中腺苷和虫草素含量的方法，本发明的方法具有快速、准确测定蛹虫草子实体及其固体培养残基中腺苷和虫草素含量，有效控制人工培养蛹虫草产品质量的特点。

一种HPLC法分析蛹虫草子实体和其固体培养残基中腺苷和虫草素含量的方法，包括以下步骤：

（1） 腺苷和虫草素标准溶液的制备和蛹虫草子实体及其固体培养残基供试溶液制备；

腺苷和虫草素标准溶液制备：称取干燥至恒重的腺苷及虫草素标准品置于容器中，用水溶解并定容作为标准储备液，加超纯水将所述标准储备液稀释成若干不同浓度的腺苷和虫草素标准溶液；

分别制备蛹虫草子实体及其固体培养残基供试溶液：将蛹虫草子实体烘干，经粉碎机粉碎后过筛，精确称取干燥至恒重的蛹虫草子实体粉末样品，加入提取液进行提取，提取结束后分离得上清液，即为蛹虫草子实体供试溶液；将蛹虫草固体培养残基烘干，经粉碎机粉碎后过筛，精确称取干燥至恒重的蛹虫草固体培养残基粉末样品，加入提取液进行提取，提取结束后分离得上清液，即为蛹虫草固体培养残基供试溶液；

（2）分别精密吸取腺苷和虫草素标准溶液及蛹虫草子实体供试溶液，过滤后注入进样小瓶，测定蛹虫草子实体供试溶液应呈现与腺苷和虫草素标准溶液色谱保留时间相同的色谱峰；分别精密吸取腺苷和虫草素标准溶液及蛹虫草固体培养残基供试溶液，过滤后注入进样小瓶，测定蛹虫草固体培养残基供试溶液应呈现与腺苷虫草素标准溶液色谱保留时间相同的色谱峰；测试的色谱条件如下：色谱柱为XBridgeTM C18(5 μm, 4.6 x 150 mm)；流动相：甲醇、超纯水，体积比为10:90；流速：1.0 ml/min；进样量：10 μL，自动进样；柱温：30 ℃；检测波长：254 nm。

在本发明的优选实施例中，所述腺苷和虫草素标准溶液制备方法为：精确称取干燥至恒重的腺苷及虫草素标准品各4mg，准确到0.0001 g，于50 ml容量瓶中用水溶解并定容作为标准储备液，浓度记为80 μg/ml；然后将所述标准储备液用超纯水稀释成2 μg/ml、5 μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml、40 μg/ml、80 μg/ml的腺苷和虫草素标准溶液。