[发明专利]一种从红凤菜新鲜茎叶中提取分离总黄酮的方法

说明书

技术领域

本发明涉及从植物中提取分离有效成分的一种方法，具体是从红凤菜的新鲜茎叶中提取分离总黄酮。

背景技术

红凤菜(Gynura bicolor DC.)为菊科菊三七属植物，别名血皮菜、观音菜、观音苋、紫背天葵等，主要分布于我国南方各地，全草入药，味苷、辛，性凉，具有凉血止血、清热消肿的功效，治咳血、血崩、痛经、血气痛、支气管炎、盆腔炎、中暑、阿米巴痢疾，外用治创伤出血、溃疡久不收口、疗疮痛疖、甲沟炎。红凤菜还可作为蔬菜食用，近年来我国多个地区有栽培和销售。

红凤菜中含有黄酮类成分。卓敏等从红凤菜中分离得到6个黄酮类化合物：山柰酚、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷、高车前苷、山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(6→1)-α-L-鼠李糖苷、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(6→1)-α-L-鼠李糖苷、槲皮素-双-3-O-β-葡萄糖苷；吕寒等从红凤菜中分离得到5个黄酮类化合物：槲皮素、山柰酚、槲皮苷、异槲皮苷、芦丁；吕寒等采用高效液相与多级质谱联用法对红凤菜提取物中的黄酮类成分进行检测，确定提取物中含有5个黄酮类化合物：槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(6→1)-α-L-鼠李糖苷、山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(6→1)-α-L-鼠李糖苷、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖、槲皮素-3-O-鼠李糖苷、山柰酚。

可见，红凤菜的黄酮类化合物主要是槲皮素、山柰酚及其苷类成分，这些成分多具有保护心血管、抗肿瘤、抗糖尿病、抗氧化、抗炎、抗病毒等作用，从红凤菜中提取黄酮类化合物具有重要意义。

裴咏萍等研究了红凤菜总黄酮的提取工艺，以红凤菜的干燥叶片为原料，确定的最佳提取工艺是依次以12倍量、10倍量70％乙醇提取2次，2h/次。

卓敏等用红凤菜地上部分干样，分别用95％、75％、60％乙醇冷浸提取，浸膏混悬于水中，先后用石油醚、醋酸乙酯萃取，醋酸乙酯部分经过反复硅胶柱、C₁₈柱、Sephadex LH-20柱等层析，最终分离得到山柰酚等黄酮类单体化合物。吕寒等用红凤菜干品粉末，用70％乙醇热回流提取，减压浓缩挥去乙醇，冷却沉淀，取上清液用大孔树脂柱层析，依次用10％、20％、50％、95％乙醇洗脱，合并50％乙醇洗脱部分，反复硅胶柱层析，再结合聚酰胺柱层析和Sephadex LH-20柱层析，得到槲皮素等黄酮类单体化合物。以上两种红凤菜黄酮类物质的提取分离方法都采用干燥的地上部分为原料，提取物经过多次反复柱层析，采用氯仿、甲醇冼脱，步骤繁多，毒性较大。

吕寒等提供了一种红凤菜总黄酮提取物的制备方法(专利申请号：201010611189.X)，以干燥的红凤菜为原料，经过醇提、加水冷沉、大孔吸附树脂层析2次，以乙醇-水梯度洗脱，得到红凤菜总黄酮提取物。以芦丁为对照品，用0.1mol·L^-1AlCl₃·6H₂O显色，比色法测定总黄酮含量，结果显示该提取物中的总黄酮含量可达50％以上。该方法也以干燥的红凤菜为原料，经过2次大孔吸附树脂层析，方法简便，但所得提取物中的总黄酮含量较低。

李法庆等提供了一种从新鲜红凤菜中提取紫色素及总黄酮的方法(专利申请号201110218685.3)，以新鲜红凤菜为原料，用乙醇温浸提取，提取液经过超滤系统超滤一纳滤系统浓缩—离子交换树脂层析一大孔吸附树脂层析等步骤，获得总黄酮结晶物，滤出干燥后得到总黄酮。该方法以新鲜红凤菜为原料，得到总黄酮结晶产物，但该法用到超滤系统和纳滤系统，设备条件要求高，操作步骤多。

本发明以红凤菜新鲜茎叶为原料，无需干燥加工，既节省劳力又降低能耗；本发明仅需2次柱层忻，工艺简单，操作方便；本发明可得到高含量的总黄酮提取物，采用高效液相(HPLC)技术检测，析出的结晶部分总黄酮含量达到90％以上，母液部分总黄酮含量达到80％以上；本发明层析分离所采用的填料为大孔树脂和聚酰胺，方便易得、价格便宜且可再生，洗脱液采用乙醇和水，生产成本低廉；本发明在总黄酮提取分离的整个流程中，涉及的溶剂仅有乙醇和水，操作安全，产品无残毒，对环境无污染。

发明内容

本发明的目的是提供一种工艺简单、成本低廉、操作安全、能耗低、对环境无污染、可用于工厂化生产的方法，从红凤菜的新鲜茎叶中提取分离高纯度总黄酮。