[发明专利]一种提取纯化尼亚考甙的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然植物提取技术领域，涉及一种提取纯化尼亚考甙的方法。

背景技术

尼亚考甙（Nyasicoside），是从仙茅科(Hypoxidaceae) 大叶仙茅Curculigo capitulata(Lour.)O.Kuntze根茎中提取分离得到的一种苷类化合物，分子式：C₂₃H₂₆O₁₁，分子量：478.45，分子结构式为：

尼亚考甙具有抗心律失常，对哇巴因所致的豚鼠心律失常有很强的抑制活性。本品在3μM时，对由6μM哇巴因所致的豚鼠心律失常能恢复心律正常达10分钟以上。

国内现有技术中，尚未见制备尼亚考甙生产工艺的相关专利报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种从大叶仙茅的根茎中提取纯化尼亚考甙的方法。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

1）取大叶仙茅的根茎粉碎，加生物酶酶解1-3天，得酶解原料；

2）用醇类溶液对酶解原料进行微波提取，提取液回收乙醇；

3）浸膏加热水溶解，上大孔树脂柱吸附，水-乙醇洗脱，洗脱液用超滤膜超滤，纳滤膜浓缩，浓缩液干燥得浓缩物；

4）将浓缩物进行色谱分离，得高含量尼亚考甙。

所述步骤1）中对大叶仙茅的根茎进行粉碎处理，控制粒径为40-60目。

所述步骤1）中生物酶可选果胶酶、纤维素酶和淀粉酶中的任一种，用量为原料重量的0.1-0.8%。

所述步骤2）中醇类溶液为50-60%乙醇水溶液，固液体积比为1:8-1:13。

所述步骤2）中微波功率为800-1000W，提取2-3次，每次20-40min。

所述步骤3）中大孔树脂可选AB-8、D101、HPD100和HZ830中一种。

所述步骤3）中洗脱剂为3-5BV水→3-5BV15-30%乙醇→5-7BV55-65%乙醇。

所述步骤3）中超滤膜为截留分子量3000-10000的中空复合膜，纳滤膜为截留分子量300-500的中空复合膜，进口压力控制0.5-0.9Mpa。

所述步骤4）中色谱分离采用高速逆流色谱进行，其两相溶剂系统为氯仿-甲醇-水，体积比为（11-15）：（5-8）：（4-9），所述高速逆流色谱仪转速为850-1050rpm，流动相流速为3-5ml/min。

本发明的优势在于以大叶仙茅的根茎为原料，成本低；采用微波提取，提取时间短、提取效率高，采用的溶剂均为易回收、无毒或低毒的有机溶剂；采用大孔树脂柱层析富集纯化，可除去多种杂质，减轻了后面工序的工作量；采用高速逆流色谱分离效果好，产品纯度高。

 

具体实施方式

实施例1：

取大叶仙茅的根茎粉碎至60目，称取500g加入2倍量pH5的酸水拌湿，加0.5g纤维素酶，常温酶解2天，酶解原料投入微波萃取罐，加入4kg50%乙醇溶液微波提取40min，功率800W，放出提取液，再加入50%乙醇提取2次，合并三次提取液，用旋转蒸发仪回收乙醇至少量，加入AB-8型大孔树脂柱层析（柱径高比1:12），依次用5BV水→3BV20%乙醇→5BV65%乙醇洗脱，高效液相色谱监测，收集流分，洗脱液加入截留分子量5000的中空复合膜超滤膜超滤，透过液再加入截留分子量300中空复合纳滤膜浓缩，进口压力控制0.7Mpa，得浓缩液，将浓缩液低温干燥得浓缩物；取氯仿-甲醇-水（11:5:7）置于分液漏斗中混合均匀，取上相为固定相，下相为流动相，取上述浓缩物溶于流动相中备用，开启高速逆流色谱仪，设定流动相流速为3.0ml/min，同时开启主机电机，自流动相流出时开始进样，转速控制为950rpm，通过检测器收集尼亚考甙流分，浓缩并干燥得尼亚考甙5.41g，高效液相检测含量为90.6%。

 

实施例2：