[发明专利]一种纳米磁性Fe3O4固定脂肪氧合酶及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种纳米磁性Fe₃O₄固定脂肪氧合酶的制备方法，其特征是，包括步骤如下：

（1）纳米铁磁性粒子的制备

将KNO₃和KOH溶解于水中，在80-95℃水浴中、搅拌下滴加FeSO₄水溶液，滴加完毕后，再搅拌一段后停止搅拌，然后将悬浮液陈化取出冷却，洗涤干燥后即得到纳米磁性Fe₃O₄；

（2）SiO₂包裹改性纳米铁磁性粒子

将无水乙醇、水和正硅酸乙酯混合充分搅拌成混合液，然后加入步骤（1）制备的纳米磁性Fe₃O₄，充分搅拌后加入适量浓氨水，搅拌反应，最后取固体洗涤、干燥后即得表面包裹SiO₂的纳米Fe₃O₄；

（3）硅烷偶联剂修饰改性纳米铁磁性粒子

将无水乙醇、去离子水和KH550加入小烧杯中水解，再加入步骤（2）制备的表面包裹SiO₂的纳米Fe₃O₄，氮气保护下搅拌反应，静置，最后取固体充分洗涤干燥，即得氨基化的纳米级Fe₃O₄复合载体；

（4）磁性纳米氧化铁载体固定化脂肪氧合酶

取步骤（3）中制备氨基化的纳米级Fe₃O₄复合载体以及一定体积的粗脂肪氧合酶液，加入烧瓶中常温搅拌吸附，然后将吸附后的酶取出洗涤、干燥、即得吸附法固定的脂肪氧合酶；

或者取步骤（3）制备氨基化的纳米级Fe₃O₄复合载体、一定体积的粗脂肪氧合酶液和戊二醛加入到烧瓶中，常温下搅拌吸附，静置，将产品洗涤、干燥，即得交联法固定的脂肪氧合酶。

2.根据权利要求1所述的一种纳米磁性Fe₃O₄固定脂肪氧合酶的制备方法，其特征是，步骤（1）中KNO₃浓度为15-25wt%，KOH浓度为0.4-0.5moL/L，向体系中加入FeSO₄·7H₂O的摩尔量为KOH摩尔量的0.5-0.8倍。

3.根据权利要求1所述的一种纳米磁性Fe₃O₄固定脂肪氧合酶的制备方法，其特征是，步骤（2）所述的混合液中无水乙醇的体积浓度为85-95%，正硅酸乙酯的体积浓度为3-6%，Fe₃O₄加入的质量g与混合液的体积mL比例为1:15-25，氨水的用量为液体总体积的0.005-0.01倍，氨水浓度为25-28%。

4.根据权利要求1所述的一种纳米磁性Fe₃O₄固定脂肪氧合酶的制备方法，其特征是，步骤（2）所述的搅拌反应时间8-12小时。

5.根据权利要求1所述的一种纳米磁性Fe₃O₄固定脂肪氧合酶的制备方法，其特征是，步骤（3）中无水乙醇与去离子水的体积比为93-96：4-7，KH550的加入量为水与乙醇总质量的3-7%；加入步骤（2）制备的表面包裹SiO₂的纳米Fe₃O₄的量为体系液体总质量的6-12%。

6.根据权利要求1所述的一种纳米磁性Fe₃O₄固定脂肪氧合酶的制备方法，其特征是，步骤（3）所述的搅拌反应为1-4h，静置时间8-12h。

7.根据权利要求1所述的一种纳米磁性Fe₃O₄固定脂肪氧合酶的制备方法，其特征是，步骤（4）中氨基化的纳米级Fe₃O₄复合载体的质量g与粗脂肪氧合酶液的体积mL比为1:15-25，戊二醛的用量为粗脂肪氧合酶液体积的0.5-1.5%，粗脂肪氧合酶液的酶活性为6×10⁵U/mL以上，搅拌吸附的时间1-3h。