[发明专利]富含二萜酚类化合物的见血清提取物及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种见血清提取物及其制备方法和用途，特别是涉及一种富含二萜酚类化合物的见血清提取物及其制备方法和用途。

背景技术

见血清为兰科植物脉羊耳兰Liparis nervosa(Thunb.)Lindl.的全草，又称“立地好”、“黑兰”、“矮胖儿”，性寒，味苦，凉血止血、清热解毒。见血清常生长在山野、溪边等阴湿处，分布于四川、湖北、台湾等地，目前民间用药材均为野生。

迄今，国内外对见血清的药理作用及临床报道较少，主要集中在见血清的止血活性上，还未见有见血清抑制血小板聚集活性、抗肿瘤活性的报道。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种富含二萜酚类化合物的见血清提取物的制备方法及该方法制得的见血清提取物。

本发明的目的之二在于提供上述见血清提取物在制备治疗或预防因血小板过度聚集引起的血栓、心肌梗塞疾病药物中的应用。

本发明的目的之三在于提供上述见血清提取物在制备治疗乳腺癌、直肠癌、宫颈癌药物中的应用。

本发明提供的一种富含二萜酚类化合物的见血清提取物的制备方法包括如下步骤：

（1）将见血清全草干燥后粉碎，然后加入其重量5～15倍的提取溶剂进行提取，得提取液，所述提取溶剂为水、甲醇、乙醇中的一种或一种以上；

（2）将提取液过滤、浓缩、干燥后用适量水进行分散，然后依次用石油醚或环己烷、乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯得浸膏；

（3）将步骤(2)得到的浸膏上正相硅胶柱进行层析，用石油醚-丙酮梯度洗脱，收集体积比90:1～50:1洗脱部位，减压回收溶剂；

（4）将步骤（3）得到的洗脱液进行反相C₁₈填料脱色，采用含甲醇的水溶液进行梯度洗脱，收集60%～80%甲醇水溶液洗脱部分，低温减压回收得到提取物。

进一步的，步骤（3）中采用体积比100:1、90:1、80:1、70:1、60:1、50:1、30:1、10:1的石油醚-丙酮进行梯度洗脱，收集体积比90:1～50:1洗脱部位。

进一步的，步骤（4）中采用浓度为0%、20%、40%、60%、80%、100%的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集60%～80%洗脱部分。

将步骤(4)得到的60%甲醇洗脱部位进行反复重结晶可制备得到迷迭香酚和表迷迭香酚，80%甲醇洗脱部位进行反复重结晶可制备得到鼠尾草酚。

本发明提供的一种富含二萜酚类化合物的见血清提取物由上述方法制得。

本发明还提供了上述见血清提取物在制备治疗或预防由血小板过度聚集引起的血栓、心肌梗塞疾病药物中的应用、以及在制备治疗乳腺癌、直肠癌、宫颈癌药物中的应用。

由于见血清中所含鼠尾草酚、迷迭香酚等活性成分为中低极性化合物，在提取时，适宜的醇浓度，可以提高见血清中活性成分的回收率，但对于见血清中活性成分的提取而言，上述提取方法及任意组合都可达到本发明所述的提取物。提取时见血清全草与溶剂的重量比以1:5～15为宜，考虑到提取物中活性成分的稳定性，应尽量在常压及溶剂沸点范围内进行提取。

本发明所提供的富含二萜酚类化合物的见血清提取物具有抑制血小板聚集活性和抗肿瘤活性，可用于制备治疗或预防因血小板过度聚集引起的血栓、心肌梗塞等心脑血管疾病的药物和治疗乳腺癌、直肠癌、宫颈癌的药物。

下面结合实施例对本发明做进一步详细说明。

具体实施方式

实施例1见血清提取物的制备

将见血清全草干燥后粉碎，然后加入其重量12倍的80%乙醇冷浸提取3次，每次24小时，得绿褐色滤液，合并滤液，减压回收乙醇得浸膏，将浸膏加适量水分散后，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取；将乙酸乙酯部位浸膏上正相硅胶柱(200目)，用体积比100:1、90:1、80:1、70:1、60:1、50:1、30:1、10:1的石油醚-丙酮梯度洗脱，收集体积比90:1～50:1洗脱部位，减压回收溶剂；再将所得浸膏上C₁₈反相柱脱色，采用浓度为0%、20%、40%、60%、80%、100%的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集60%～80%洗脱部分，低温减压回收得提取物。

该提取物对光、氧、热不稳定，极容易被氧化变色，需避光避热密封保存。采用紫外分光光度法测定提取物中总酚含量为80%。采用HPLC法(C₁₈柱；流动相：0.1%磷酸-60%乙腈；流速：1.0ml/min；检测波长：230nm)检测其中主要成分鼠尾草酚和迷迭香酚的含量之和为37%。

实施例2见血清提取物的制备