[发明专利]卵黏蛋白复合增溶剂及卵黏蛋白增溶方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种卵黏蛋白复合增溶剂及卵黏蛋白增溶方法。

背景技术

卵黏蛋白是蛋清中一种非常重要的蛋白质之一，有抗菌、抗病毒、抑制肿瘤细胞的增殖以及降低血清胆固醇等多种生物活性，具有重要的医学、营养学和保健方面的研究开发价值。然而，现有技术通过沉淀方法制备的卵黏蛋白通常为白色、黏连的絮状物，难溶于水和一般盐溶液，卵黏蛋白这种低溶解性的特点极大地影响和限制了其许多功能特性的充分发挥，所以改善和提高溶解性一直是卵黏蛋白研究的重要内容之一。

目前改善卵黏蛋白溶解性的方法主要是通过添加变性剂或还原剂，如含SDS、尿素、盐酸胍、β-巯基乙醇、二硫苏糖醇等来提高其溶解性。然而这些变性剂的使用会破坏蛋白质和细胞膜的稳定性，并不适合食品或药品中的大量应用。不溶性卵黏蛋白在超声波或机械力的作用下也可以溶解于弱碱性的溶液中，然而这种方法通常会导致分子中二硫键的断裂或糖链的释放，造成蛋白质结构的破坏。目前尚无行之有效的方法可以在不破坏卵黏蛋白结构、不影响蛋白质活性的条件下获得高溶解性的卵黏蛋白样品。

发明内容

本发明的目的是为了克服卵黏蛋白溶解度低的缺陷，提供一种卵黏蛋白复合增溶剂及卵黏蛋白增溶方法。

上述目的可以通过以下技术方案实现：

一种卵黏蛋白复合增溶剂，它由极性脂肪族氨基酸或其盐与多元醇组成，所述极性脂肪族氨基酸或其盐与多元醇的重量比为5～10∶1，所述极性脂肪族氨基酸为精氨酸和谷氨酸中的一种或两种混合物。

优选地，所述多元醇为甘油或山梨醇。

进一步优选地，所述极性脂肪族氨基酸为精氨酸和谷氨酸混合物，所述混合物中精氨酸与谷氨酸的重量比为0.7～1.4∶1。

一种卵黏蛋白增溶方法，它是将卵黏蛋白与卵黏蛋白复合增溶剂按1∶2～8的重量比溶解于水中制成溶液，使溶液中的极性脂肪族氨基酸或其盐的浓度为100～400mmol/L而实现的。

所述卵黏蛋白复合增溶剂由极性脂肪族氨基酸或其盐与多元醇组成，所述极性脂肪族氨基酸或其盐与多元醇的重量比为5～10∶1，所述极性脂肪族氨基酸为精氨酸和谷氨酸中的一种或两种混合物。

优选地，所述多元醇为甘油或山梨醇。

进一步优选地，所述极性脂肪族氨基酸为精氨酸和谷氨酸混合物，所述混合物中精氨酸与谷氨酸的重量比为0.7～1.4∶1。

再进一步优选地，所述卵黏蛋白与卵黏蛋白复合增溶剂的重量比为1∶6。

与现有技术中常采用的变性剂增溶法、碱处理以及超声助溶法相比，本发明的有益效果在于：1）条件温和，通过精氨酸和/或谷氨酸与卵黏蛋白在溶液中形成静态复合物从而显著降低蛋白质表面疏水性，有效提高了卵黏蛋白的溶解度；2）静态复合物的形成有利于卵黏蛋白活性位点的暴露，促进了卵黏蛋白对新城疫病毒的粘附，提高其抗病毒活性；3）本发明能够保护蛋白质的天然构象，避免卵黏蛋白在溶液中的降解，从而延长卵黏蛋白有效期一倍以上；4）所用试剂安全无毒，不会导致细胞膜和蛋白质的损伤，适合在食品和医药领域应用；5）本发明还具有方法简单，成本低等特点。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

取1g卵黏蛋白、2.4g卵黏蛋白复合增溶剂（含有2.0g精氨酸以及0.4g甘油），加入到100mL水中（溶液中精氨酸的浓度为115mmol/L），定容后混匀，搅拌6～8h，1500r/min离心5min，用凯氏定氮法分别测定添加的总蛋白质、上清以及相应溶剂中的氮含量，溶剂的溶解性能以氮溶性指数表示。

卵黏蛋白溶解度的测定参照现有文献公知的方法（Hiidenhovi et al,2008）进行，根据A₂₈₀=KCL，其中K为吸光系数，按蛋白质的平均系数1L/(g·cm)计算，则卵黏蛋白浓度C(mg/mL)=A₂₈₀。

通过本实施例测定的氮溶性指数及溶解度如表2所示。

实施例2～6

实施例2～6中卵黏蛋白复合增溶剂的用量、配方等数据见表1，卵黏蛋白增溶方法的步骤与实施例1相同，即均是取卵黏蛋白、卵黏蛋白复合增溶剂，加入到100mL水中，定容后混匀，搅拌6～8h，1500r/min离心5min。

表1 实施例1～6中卵黏蛋白复合增溶剂的用量、配方

通过本实施例测定的卵黏蛋白在精氨酸及其盐溶液中的溶解度的结果如表2所示。