[发明专利]检测C-反应蛋白的免疫比浊试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫比浊的检测方法，尤其涉及检测C-反应蛋白的免疫比浊试剂盒及其制备方法。

背景技术

C-反应蛋白快速检测酶免试剂盒，可用于人尿液、血浆和血清检测。CRP，肺炎球菌细胞壁c多糖蛋白，一种急性时相（期）蛋白，亦称C反应蛋白，正常参考值≤6mg/L。本身由肝细胞产生能结合肺炎球菌细胞壁糖蛋白，能监测疾病的发展情况为非特异性的检验指标，很多疾病时都可以表现出来。

CRP的检测被广泛用于监测不同的炎症状态，也可用于监测对炎症的治疗效果。随着高灵敏度的检测方法的不断发展，CRP还是心血管疾病强的预测因素，并且是动脉粥样硬化的重要介质。更为重要的是近年来研究发现，在小鼠的狼疮性肾炎中发现，CRP能延迟狼疮性肾炎的发病、降低抗体水平、提高了小鼠的存活率并使尿蛋白症状减轻。依赖钙离子，CRP还能与受损组织以及某些病原微生物结合，表现出其在天然免疫系统中的重要作用。CRP与FcTR的相互作用诱导前炎性细胞因子(IL一6等)的产生，从而放大了炎症反应。CRP在IL一6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)及其他细胞因子的诱导下能在肝脏快速合成，通常炎症刺激后24～48h血清CRP水平出现峰值，血清CRP水平会从每毫升小于1p-g增加到每毫升几百微克，而且随着疾病的消除，CRP能从血循环中快速清除。由于CRP不受年龄、性别、贫血、妊娠等机体状态和治疗药物等因素的影响，因此CRP是感染性炎症反应的敏感指标。

颗粒增强免疫透射比浊法（particle—enhanced turbidimetric immunoassay，PETIA）是近年来出现的一种较为稳定、准确的体液蛋白均相免疫比浊检测方法，其基本原理是一定粒径胶乳颗粒的表面交联单克隆或多克降抗体，当交联有抗体的微球与抗原结合后，在短时间内会迅速聚集在一起，改变了反应体系的吸光度。这种改变与被测抗原的浓度有一定的相关性，在一定范闹内可以反映被测抗原的浓度。此技术通过颗粒增强的方式，放大了抗原抗体反应，弥补了普通透射比浊法灵敏度不够的缺点，同时又继承了透射比浊法稳定性好、方便快速的优点，克服了ELISA和RIA方法的缺点，已越来越广泛应用于临床上各种微量蛋白的定量检测。日前，颗粒增强免疫透射比浊法广泛用于肾功能检测、心脑血管功能检测检测、糖尿病检测和脂类检测等，取得了良好的社会效益。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测C-反应蛋白的免疫比浊试剂盒及其制备方法。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：

检测C-反应蛋白的免疫比浊试剂盒，特点是：包括盒体、应用液瓶、抗体悬浮液瓶和标准品瓶，所述应用液瓶、抗体悬浮液瓶和标准品瓶置于盒体内，所述应用液瓶中装有应用液，应用液的组分及其重量百分比为：防腐剂0.01～0.2%，氯化钠1%～20%，缓冲液10～500mmol/L；所述抗体悬浮液瓶中装有包被C-反应蛋白单克隆抗体的乳胶悬液，乳胶悬液的组分及其重量百分比为：包被C-反应蛋白单克隆抗体的乳胶0.05%～0.5%，防腐剂0.01～0.5%，缓冲液10～500mmol/L；所述标准品瓶中装有C-反应蛋白标准品。

进一步地，上述的检测C-反应蛋白的免疫比浊试剂盒，所述应用液中的防腐剂为叠氮钠或Proclin-300或两者混合物；所述应用液中的缓冲液为磷酸盐、碳酸盐、三羟基氨基甲烷或甘氨酸。所述乳胶悬液中的防腐剂为叠氮钠、Proclin-300或两者混合物；所述乳胶悬液中的缓冲液为磷酸盐、碳酸盐、三羟基氨基甲烷或甘氨酸。

本发明检测C-反应蛋白的免疫比浊试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

a）制备乳胶悬液：在磷酸盐缓冲液中将乳胶微球与包被C-反应蛋白单克隆抗体混匀，30～40℃旋转反应过夜，用清洗储存液进行清洗得到乳胶悬液，置于2～8℃环境下保存；

b）制备应用液：将表面活性剂、防腐剂、氯化钠和缓冲液同溶于水，得到应用液；

c）配制C-反应蛋白标准品：选用C-反应蛋白标准品，由缓冲液稀释成浓度为3.2mg/L。