[发明专利]一种基于Hepa1-6肝癌细胞自噬小体-DRibbles的B细胞疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于肿瘤疫苗研制技术领域，具体涉及为一种基于Hepa1-6肝癌细胞自噬小体-DRibbles的B细胞疫苗及其制备方法。

背景技术

自噬(autophagy)是普遍存在的细胞生物学现象，是指胞浆组分及细胞器被包裹形成自噬小体(autophagosome)，然后与溶酶体融合形成自噬溶酶体(autolysosome)，最终实现胞内物质降解的过程。

大量研究结果显示：采用自噬抑制剂(3-AM、wortmannin)、siRNA技术下调自噬相关基因(Atg12)等方法抑制肿瘤细胞的自噬，则明显降低DC基于树突状细胞交叉提呈肿瘤抗原的免疫效果；反之，采用自噬诱导剂(rapamycin、NH₄CL)、饥饿等方法诱导肿瘤细胞产生细胞自噬，则明显增强DC交叉提呈的免疫效果----pAPC交叉提呈自噬小体源性抗原的效果明显强于肿瘤细胞和可溶性蛋白。提示：肿瘤细胞的细胞自噬及其形成的自噬小体(autophagosome)与pAPC的抗原提呈有直接的关系，利用自噬小体的抗原呈递功能可为肿瘤免疫治疗提供一种新策略。因此，肿瘤细胞的自噬小体是肿瘤抗原的有效载体。

依据肿瘤免疫学的基本原理，细胞免疫应答在抗肿瘤免疫应答中起着主要作用，但大多数肿瘤细胞表面缺乏免疫共刺激分子，自身无法激活初始T细胞，必须依赖专职抗原提呈细胞(pAPC)通过交叉提呈(cross-presentation)方式提呈肿瘤抗原并诱导特异性T细胞应答。然而，在肿瘤发生发展过程中，肿瘤抗原不能有效呈递给T细胞是导致免疫逃逸的重要原因。同时在荷瘤机体中，由于存在抗原递呈细胞的功能低下甚至缺陷，可造成肿瘤细胞逃避机体的免疫监视，导致肿瘤的形成和发展。目前，基于树突状细胞（DC）的肿瘤疫苗被认为是最常见的肿瘤疫苗之一，已开展大量基础研究和临床试验。然而，研究试验中存在许多问题有待解决，包括DC来源、制备过程、DC的抗原负载、用量、使用频度、免疫途径和次数等，都大大的限制了DC的使用。如何更好的利用其他pAPC提呈肿瘤抗原成为目前关注的热点。

B细胞除介导体液免疫外也是重要的pAPCs。B细胞表面组成型表达MHC II类分子，白细胞介素-4刺激后表达增加；但必须通过抗原受体与抗原交联并由Th细胞提供协助之后才能激活协同刺激分子的表达。在胸腺依赖抗原诱导的抗体产生中起重要作用。由于血液中B细胞在白细胞的比例达到20%-30%，并且易于分离、制备。因此，利用B细胞有效提呈抗原将极大的促进肿瘤疫苗的发展。

佐剂(Adjuvant)又称免疫调节剂(Immuno-modulator)或免疫增强剂(Immune potentiator)，是指先于抗原或与抗原混合或同时注入动物体内，能非特异性地改变或增强机体对该抗原的特异性免疫应答，发挥辅助作用的一类物质。佐剂的种类繁多，其增强机体免疫应答的机理各不相同,可以增强抗原的免疫原性、免疫应答速度及耐受性,可调节抗体对抗原的亲和性与专一性,可刺激细胞介导的免疫,可促进胃肠黏膜对疫苗的吸收。近来发现，Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)在B细胞活化以及B细胞作为pAPCs过程中也发挥重要的佐剂作用，特别是在决定B细胞对特异抗原是产生免疫激活还是免疫耐受时，病原体相关分子模式(Pathogen-associated molecular patterns，PAMPs)与TLRs结合产生的信号是重要的开关。TLR不但识别外源性PAMP(如LPS、肽聚糖、脂肽和CpG等)，还可识别内源性损伤相关分子模式(damage-associated molecular patterns,DAMP)，如热休克蛋白(HSP90,HSP94)，钙网织蛋白(calreticulin)，高迁移率族蛋白B1(HMGB1)等，在B细胞增殖分化、产生抗体及类别转换等起调节作用。由于靶向肿瘤的蛋白及多肽的疫苗激发免疫应答的强度不够。因此，如何有效地利用PAMP、DAMP等TLR配体对多肽肿瘤疫苗的佐剂效应，越来越受到人们的关注。

发明内容

技术问题：本发明所要解决的技术问题，是提供一种基于Hepa1-6肝癌细胞自噬小体-DRibbles的B细胞疫苗，及这种疫苗的制备方法。

技术方案：为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

首先本发明提供一种基于Hepa1-6肝癌细胞自噬小体-DRibbles的B细胞疫苗，这种B细胞疫苗能够提呈Hepa1-6肝癌细胞自噬小体-DRibbles所含有的肿瘤抗原。