[发明专利]人体血液中铁蛋白和骨碱性磷酸酶联合检测试纸及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白质、肽或氨基酸的检测，特别是人体血液中铁蛋白和骨碱性磷酸酶联合检测试纸及其制备方法。 

背景技术

铁蛋白作为机体内一种贮存铁的蛋白，其血清（血浆）浓度代表机体铁储备状况。在感染或某些肿瘤发生时，血清（血浆）铁蛋白浓度也会作为急性时相反应蛋白异常增高。一般情况下，血清铁蛋白浓度在20至200 ug/L，即20-200ng/ml。 

目前，血清（血浆）铁蛋白含量的主要检测方法包括放射免疫法、酶联免疫法和化学发光法等。上述这些检测方法均需要依赖相应的复杂的仪器设备，还需要使用液体试剂，因此，具有检测程序复杂、检测速度慢以及检测结果不可靠等缺陷。此外，这些方法所需样本量较大，都要抽取静脉血进行检测，也不易于被儿童接受。 

钙缺乏是我国人群尤其是儿童常见的营养缺乏疾病。血清（血浆）骨碱性磷酸酶浓度对辅助诊断钙缺乏具有重要意义。目前，检测骨碱性磷酸酶浓度一般采用酶联免疫法、电泳法、免疫浓缩化学法。前两种方法需从静脉取血分离血清（血浆）进行检测，不易被儿童接受，而且检测过程操作复杂、时间长；后一种方法检测结果的误差较大，不能得出定量测定的结果，并且也存在操作繁琐的弱点。 

发明内容

本发明的目的是为了解决上述技术问题，设计了人体血液中铁蛋白和骨碱性磷酸酶联合检测试纸及其制备方法。 

本发明的技术方案为： 

一种人体血液中铁蛋白和骨碱性磷酸酶联合检测试纸，包括底板、粘贴于底板中部的硝酸纤维素膜、分别搭接于硝酸纤维素膜两侧的标记物垫、吸样垫和与标记物垫搭接的上样垫，所述硝酸纤维素膜上按顺序依次平行设置有铁蛋白单克隆抗体构成的第一检测条带，骨碱性磷酸酶多克隆抗体构成的第二检测条带和羊抗鼠IgG 抗体构成的质控条带，所述标记物垫是由无纺布上含有胶体金标记的人铁蛋白单克隆抗体和胶体金标记人骨碱性磷酸酶单克隆抗体构成的。

所述标记物垫的一端与硝酸纤维素膜靠近第一检测条带的一侧搭接，另一端与上样垫搭接。 

所述吸样垫与硝酸纤维素膜靠近质控条带的一侧搭接。 

一种人体血液中铁蛋白和骨碱性磷酸酶联合检测试纸的制备方法，包括如下步骤： 

① 标记物垫的制备：

a. 用氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为30-50nm 的胶体金溶液；

b. 取100ml上述胶体金溶液，用0.2M的K₂CO₃溶液调节胶体金溶液至pH=9.0；

c. 将上述pH=9.0的胶体金溶液置于磁力搅拌器上缓慢搅拌，按每100ml溶液分别加入0.5mg~1.5mg 铁蛋白单克隆抗体和骨碱性磷酸酶抗体，缓慢滴加到胶体金溶液中；

d. 持续搅拌1小时后，加入浓度为10%~20%的BSA牛血清白蛋白至终浓度为0.2％和浓度为20%的PEG聚乙二醇20000至终浓度为0.1％，搅拌30分钟，以12000rpm的转速离心30分钟，弃上清，沉淀用pH=9.0的胶体金溶液复溶至76.5ml；

e. 按1ml溶液铺16cm²的比例将步骤d得到的溶液均匀地铺在无纺布上，再将无纺布置于温度20～25℃、湿度小于30％的干燥间干燥2～4 小时，制成标记物垫；

② 硝酸纤维素膜上第一检测条带、第二检测条带和质控条带的制备：

将1mg/mL后的铁蛋白单克隆抗体溶液用喷膜仪在硝酸纤维素膜上按1.0ul/cm划线包被，构成第一检测条带；

将1mg/mL后的骨碱性磷酸酶多克隆抗体溶液用喷膜仪在硝酸纤维素膜上按1.0ul/cm 划线包被，构成第二检测条带；

将2mg/mL后的羊抗鼠IgG抗体溶液用喷膜仪在硝酸纤维素膜上按1.0ul/cm 划线包被，构成质控条带；

包被完成后，将硝酸纤维素膜置于干燥间干燥3～4 小时，即制成包被的硝酸纤维素膜；

③ 人体血液中铁蛋白和骨碱性磷酸酶联合检测试纸的装配：

在温度为20～25℃、湿度小于30％的干燥室内，取底板，将已包被的硝酸纤维素膜粘贴在底板的中部，在硝酸纤维素膜靠近第一检测条带的一侧搭接标记物垫，在标记物垫的另一侧搭接粘贴上样垫，在硝酸纤维素膜靠近质控条带的一侧距边缘搭接吸样垫；然后用裁剪机将贴好的底板切成宽度为3-5mm的试纸条。