[发明专利]多索茶碱注射制剂中茶碱的测定方法

说明书

技术领域

本发明属于药物检测领域，具体涉及多索茶碱注射制剂中茶碱的测定方法。

背景技术

多索茶碱（Doxofylline）是甲基黄嘌呤的衍生物，是一种支气管扩张剂，可直接作用于支气管，松弛支气管平滑肌。通过抑制平滑肌细胞内的磷酸二酯酶等作用，松弛平滑肌，从而达到抑制哮喘的作用。与茶碱比较，有相同的功效，但副作用明显要少。

多索茶碱于1980年由意大利ABC公司开发上市。经过不断地研究开发，临床使用上已有较为丰富的剂型：口服溶液、片剂、胶囊剂、颗粒剂、大小容量注射液制剂、注射用冻干粉等剂型。

多索茶碱，化学名称为：1,3-二甲基-7-（1,3-二氧环戊基-2-基）甲基-3,7-二氢-1H-嘌呤-2,6-二酮。分子式：C₁₁H₁₄N₄O₄；分子量：266.26。白色针状结晶或结晶性粉末；无臭，味微苦。在氯仿中易溶，在水、乙醇或丙酮中微溶，在乙醚中几乎不溶。本品稳定性较好，可耐受热压灭菌，适合制成注射液。

茶碱为多索茶碱的合成起始原料，在现有的多索茶碱及其制剂的质量标准中，均未对其进行控制。本发明的发明人欲提供一种检测含量多索茶碱注射制剂中茶碱的测定方法，可用于鉴别及含量测定。

发明内容

本发明所解决的技术问题是提供一种多索茶碱注射制剂中茶碱的测定方法。本发明测定方法采用高效液相色谱法进行测定，可用于鉴别及含量测定。

检测条件如下：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。

流动相A：醋酸盐缓冲液；流动相B：乙腈；其中，醋酸盐缓冲液含醋酸钠0.005mol/L至0.1mol/L（优选浓度为0.01mol/L），以冰醋酸调节pH值为1.5至7.5（优选pH值为3.8）；

以流动相A：流动相B以下述体积比70～95:30～5配制流动相；或上述两种流动相A、B采用以下梯度洗脱条件作为流动相；

测波长为265nm-275nm；优选271nm。

理论板数按茶碱峰计算不低于5000。

样品制备方法：

1）对照品溶液的制备：精密称取茶碱对照品适量，加流动相溶解并稀释成每1ml约含茶碱1μg的溶液，作为对照品溶液；

2）供试品溶液的制备：取多索茶碱注射制剂作为供试品：若多索茶碱注射制剂为液体制剂，则直接取检品作为供试品溶液；若多索茶碱注射制剂为固体制剂，将其配制成含多索茶碱10mg/ml的溶液为供试品溶液。

精密量取对照溶液和供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，即可。

若供试品溶液的色谱图中如有与茶碱保留时间一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，即可得到供试品中茶碱含量，为简便、快捷、准确测定多索茶碱注射制剂中的茶碱杂质提供了一种选择。

附图说明

图1采用恒流洗脱多索茶碱水针剂茶碱测定对照液HPLC色谱图。

图2采用恒流洗脱多索茶碱水针剂茶碱测定样品液HPLC色谱图。

图3采用梯度洗脱多索茶碱水针剂茶碱测定对照液HPLC色谱图。

图4采用梯度洗脱多索茶碱水针剂茶碱测定样品液HPLC色谱图。

具体实施方式

以下为本发明多索茶碱注射制剂中茶碱的测定的方法学考察

一、供试液制备

茶碱对照品供试液取茶碱对照品适量，用水稀释制成每1ml中含1.0μg/ml的溶液。

样品供试液取多索茶碱水针剂样品（厂家：成都百裕科技制药有限公司，批号：20101201）适量，作为样品溶液。

二、色谱条件的选择

测定波长茶碱对照液在265nm至275nm波长范围内均有较大吸收，其中271nm处有最大吸收。因此本测定可选取检测波长为265nm-275nm；优选271nm。

流动相系统的选择：

流动相A：醋酸盐缓冲液（含醋酸钠0.01mol/L，冰醋酸调节pH为3.8）：流动相B：乙腈。以A：B（90:10）为流动相，取上述对照及样品供试液进样测定，见图1及图2。茶碱在10min左右出峰，但多索茶碱出峰时间在45min以后，整个测定耗时太长，不利于生产效率提高。

在此基础上，设计梯度洗脱程序，按在A：B（90:10）洗脱10min后（此时茶碱峰已基本洗脱），提高有机相B的比例，使多索茶碱能够被快速洗脱，至洗脱后即回归原来比例，为进行下针测定准备。洗脱程序如下：