[发明专利]六价钼离子快速检测金标试纸及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种用于快速检测六价钼离子的金标试纸，底层为支撑层，中间层为吸附层，保护膜固定在吸附层上，其特征是：吸附层从测试端依次为样品垫、金标抗体结合垫、纤维素膜层及手柄端的吸水垫，其中在纤维素膜层上设有偶联六价钼离子的载体蛋白溶液印制的检测印迹和用兔抗小鼠IgG抗体溶液印制的对照印迹；所述金标抗体结合垫中包被有胶体金标记的特异性六价钼离子单克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的金标试纸，其特征是：所述纤维素膜层用硝酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜制成；所述样品垫用聚偏二氟乙烯膜、尼龙膜、玻璃纤维棉或聚酯膜制成；吸水垫用吸水滤纸制成，支撑层用不吸水的韧性材料制成；金标抗体结合垫用玻璃纤维棉制成。

3.根据权利要求1所述的金标试纸，其特征是：所述                                                偶联六价钼离子的载体蛋白为牛血清白蛋白、鸡卵清白蛋白或血蓝蛋白；检测印迹上偶联六价钼离子的载体蛋白的包被量为1μL/cm，载体蛋白浓度为1mg/mL；对照印迹上兔抗鼠IgG抗体的包被量为1μL/cm，抗体浓度为1mg/mL；所述检测印迹和对照印迹为平行排列的“︱︱”直线式印迹或“十十”字型排列印迹。

4.根据权利要求1所述的金标试纸，其特征是：所述保护膜覆盖在样品垫、金标抗体结合垫和吸水垫上，在样品垫与金标抗体结合垫交界处对应的保护膜上偏向样品垫一侧0.3-0.6 cm处印制有样品标记线。

5.根据权利要求1-4任一项所述的金标试纸，其特征是：所述偶联六价钼离子的载体蛋白溶液是由以下方法制备的：

取20 mL钼酸与1mL浓度为10 mmol/L、pH值为8.0的HEPES缓冲液混合，得到Mo⁶⁺溶液；称取10 mg异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸ITCBE溶于1mL DMSO中，形成金属螯合剂溶液；将Mo⁶⁺溶液和金属螯合剂溶液混合，调节溶液的pH值至7.4，25 ℃搅拌24 h，转速为1000 r/min，形成Mo⁶⁺-ITCBE螯合物半抗原母液；

称取20 mg 载体蛋白BSA或OVA溶于1mL浓度为10 mmol/L、pH 8.0的HEPES缓冲液中，形成载体蛋白溶液；取1mL Mo⁶⁺-ITCBE螯合物半抗原母液加入到1mL载体蛋白溶液中，调节pH值至9.0，室温下1000 r/min搅拌24 h，然后移入透析袋中透析7 d，收集透析液，制备出载体蛋白Mo⁶⁺-ITCBE-BSA或Mo⁶⁺-ITCBE-OVA，－20℃冻存备用。

6.根据权利要求1-4任一项所述的金标试纸，其特征是：所述胶体金标记的特异性六价钼离子单克隆抗体是通过以下方法制备的：

采用柠檬酸盐还原法制备，在三角烧瓶中加入975 mL双蒸水煮沸，加入15mL柠檬酸三钠，继续加热5 min，加入10 mL质量浓度为1%的氯金酸，继续加热至溶液呈橘红色，冷却至室温后得到胶体金溶液，4 ℃保存备用；

取胶体金溶液100 mL，用0.1 mol/L 的K₂CO₃溶液调节胶体金溶液的pH值至8.2，磁力搅拌下逐滴加入浓度为0.2 mg/mL的六价钼离子单克隆抗体溶液，室温温育20 min，10000 r/min离心30 min，弃上清，沉淀物用每升含100 g BSA、浓度为0.02 mol/L 的Na₂B₄O₇溶液稀释，然后10000 r/min离心30 min，得到的沉淀物再用每升含10 g BSA、0.5 g叠氮钠、浓度为0.02 mol/L 的Na₂B₄O₇溶液稀释，即获得胶体金标记的六价钼离子单克隆抗体，4 ℃保存备用；所得的胶体金溶液中金颗粒的粒径为25 nm，每1mL胶体金中含有3 ng六价钼离子单克隆抗体。