[发明专利]一种用于培养人羊膜上皮细胞的培养基

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体的说涉及一种用于培养人羊膜上皮细胞的培养基。

背景技术

人羊膜上皮细胞(amniotic epithelial cells,AECs)在受精后第8天由外胚层细胞发育而来，使其可能维持原肠胚形成胚胎干细胞的可塑性。人羊膜上皮细胞不表达HLA-A，B,C或DR抗原，移植后不易引起免疫排斥反应。在一定条件下，人羊膜上皮细胞可分化为成熟的神经元细胞，毛囊和皮肤上皮细胞，人羊膜上皮细胞理论上可以分化成为各种组织细胞。因此，对人羊膜上皮细胞培养方法的探索及对人羊膜上皮细胞的生长特性的研究具有重要意义，可为将来的组织工程应用奠定基础。

人羊膜上皮细胞是从人胎盘羊膜上分离得到，而人羊膜组织由来源于外胚层的羊膜上皮细胞和中胚层的羊膜间质细胞组成。传统的方法很难从羊膜中分离得到高纯度的羊膜上皮细胞。

目前人羊膜上皮细胞的体外大多采用小鼠3T3细胞作为滋养细胞，滋养细胞对羊膜上皮细胞的生长、增殖有促进作用。但3T3细胞是异种细胞，所含蛋白移植到人体内会引起免疫反应。

发明内容

本发明提供一种用于培养人羊膜上皮细胞的培养基，该培养基由DMEM、胎牛血清、丙酮酸钠、L-谷氨酰胺、EGF(表皮生长因子)、β-巯基乙醇、非必需氨基酸成分组成；

其中DMEM(Deulbecco's Modified Eagle Medium，改良Eagle培养基)，可以为低糖的，也可以为高糖，优选为低糖DMEM；DMEM的含量为10g/1000ml；

其中胎牛血清的体积含量为5～15％，优选含量为10％；

其中丙酮酸钠的含量为0.0550～0.2200g/1000ml；优选的为0.1100g/1000ml；

其中L-谷氨酰胺的含量为0.0731～0.2193g/1000ml；优选的为0.1461g/1000ml；

其中β-巯基乙醇的含量为1.9287～5.7861g/1000ml；优选的为3.8574g/1000ml；

其中EGF的含量为5～15ng/ml；优选的为10ng/ml；

其中非必需氨基酸的含量为0.5mM～2mM，优选含量为1mM，其中100mM非必需氨基酸的组成为：L-丙氨酸1500mg/L、L-天门冬酰胺890mg/L、L-天冬氨酸1330mg/L、L-谷氨酸1470mg/L、甘氨酸750mg/L、L-脯氨酸1150mg/L和L-丝氨酸1050mg/L；

本发明的用于培养人羊膜上皮细胞的培养基的PH值保持在7.0～7.4，优选PH值为7.2。

将以上组分混合，即可得到培养人羊膜上皮细胞的培养基。

本发明的培养基适用于人羊膜上皮细胞的培养，尤其适用于原代人羊膜上皮细胞的分离和纯化过程中的培养。本发明培养基能使在无3T3细胞的情况下成功得使人羊膜上皮细胞生长、扩增。相对于传统的培养人羊膜上皮细胞的培养基，本发明培养基能优先促进人羊膜上皮细胞的生长，同时抑制其他杂细胞的生长。由于不含3T3细胞，使得羊膜上皮细胞的培养变得简单、高效，同时降低了移植人体过程中引发免疫反应的几率。

附图说明

图1为实施例2获得的原代羊膜上皮细胞培养三天后的AECs的细胞动态图；

图2为实施例2获得的原代羊膜上皮细胞培养五天后的AECs的细胞动态图；

图3为实施例2获得的AECs传代培养三天后的细胞动态图；

图4为实施例2获得的AECs传代培养后的SSEA-4的流式细胞术检测结果图。

具体实施方式

下面结合实施例，对如何应用本发明的培养人羊膜上皮细胞的培养基从羊膜组织中分离得到高纯度的羊膜上皮细胞，做进一步详细说明。

实施例1：1000ml人羊膜上皮细胞的培养基的制备