[发明专利]一种重组植物源降血压肽

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说是一种重组植物源降血压肽基因和重组植物源降血压肽。

背景技术

高血压病指以体循环收缩压和（或）舒张压持续升高为主要临床表现，伴或不伴有多种心血管危险因素的综合征，通常简称为高血压。高血压是心脑血管病最主要的危险因素，脑卒、心肌梗死、心力衰竭及慢性肾脏病是其主要并发症。WHO公布成人高血压患病率高达15%。国内本病患病率约7-10%，随年龄增长，发病有明显上升趋势。目前世界卫生组织（WHO）推荐的治疗高血压的一线药物有六大类：（1）利尿剂；（2）α₁受体阻断剂；（3）β受体阻断剂；（4）钙拮抗剂；（5）血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)；（6）血管紧张素转换酶抑制剂(降血压肽，Angiotensin I-Converting Enzyme Inhibitory Peptides，ACEIP)。在这六类药物中，降血压肽以其安全、高效而成为目前该领域的研究热点。

调节正常人体血压的因素很多，其中最为关键的调节系统是肾素-血管紧张素调节系统（RAS）和激肽释放酶-激肽系统（KKS）。血管紧张素转换酶（ACE）是这两个系统的关键酶。在RAS系统中，ACE作用于血管紧张素Ⅰ，使其生成血管紧张素Ⅱ，从而刺激血管收缩，使血压升高；同时血管紧张素Ⅱ促使醛固酮分泌，作用于肾脏，引起钠储量和血溶量增加也使血压升高。在KKS系统中，ACE 作用于缓激肽，使其失活，抑制血管舒张。

ACEIP降血压的机理是其与ACE的亲和力远远大于血管紧张素Ⅰ与ACE的亲和力，通过与血管紧张素Ⅰ竞争ACE，降低（或抑制） ACE 的活性，使血管紧张素Ⅱ的生成减少，缓激肽的破坏减少，在二者的共同作用下有效降低血压。

目前，ACEIP主要通过酶解法从天然的植物、动物蛋白中获得，由于分离纯化过程复杂、易受原料限制、产量低而制约产业化。人工合成法获得ACEIP所需的反应条件高，成本高、副反应物及残留化合物多等不利因素，也不适于大规模生产。

发明内容：

本发明的目的是提供一种重组植物源降血压肽基因和重组植物源降血压肽。

一种重组植物源降血压肽基因，其碱基序列如序列表SEQ ID No.1所示。

一种重组植物源降血压肽，其氨基酸序列如序列表SEQ ID No.2所示。

一种重组植物源降血压肽的制备方法，步骤如下：

1）人工合成序列表SEQ ID No.1所示的基因； 

2）插入载体pUC中，扩增；

3）利用BamHⅠ和HindⅢ进行双酶切，将序列表SEQ ID No.1所示的基因插入pET28a中，获得pET28a-ACEIP；

4）转化至E.coliBL 21中，接种于LB培养基中，IPTG诱导表达后，超声破碎菌体，Ni-NTA亲和层析纯化重组目的蛋白。

本发明的另一个目的是，所述的一种重组植物源降血压肽在制备治疗高血压药中的应用。

本发明提供了一种重组植物源降血压肽，利用几种植物源降血压肽的基因序列组合，人工合成基因组合，利用重组DNA技术构建了携带植物源降血压肽基因的重组表达载体pET28a-ACEIP，利用基因工程大肠杆菌，制备了重组植物源降血压肽，通过动物实验证实，该重组降血压肽具有显著的降血压功能。本发明提供的重组植物源降血压肽的制备方法，利用重组DNA技术大肠杆菌表达，采用Ni-NTA亲和层析纯化重组目的蛋白，与传统酶解法相比，生产工艺相对简单、不受原料限制、周期短、成本低，具有广阔的应用前景。

附图说明

图1.ACEIP基因、pET28a载体片段的回收；

图2.重组表达载体pET28a-ACEIP的双酶切鉴定；

图3.重组降血压肽的SDS-PAGE电泳结果；

图4.血压测定结果。

具体实施方式

实施例1 重组植物源降血压肽氨基酸序列的设计

玉米谷蛋白酶解多肽：Pro-Ser-Gly-Gln-Tyr-Tyr；苦荞酶解多肽：Gly-Pro-Pro；油菜籽酶解多肽：Val-Trp，Val-Trp-Ile-Ser，Ile-Tyr。根据不同植物源降血压肽的氨基酸序列，设计由Lys串联的组合多肽，并包含2个重复，在肽段的N端设计肠激酶的酶切位点（Asp-Asp-Asp-Asp-Lys）。氨基酸序列如下：