[发明专利]使用RP-HPLC法测定桦树皮中桦木醇含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及桦木醇含量检测方法，具体涉及桦树皮中桦木醇的反相高效液相色谱法(RP-HPLC)含量测定。

背景技术

桦木醇(结构式见附图1)是一种五环三萜类化合物，又名白桦酯醇、桦木醇、桦木脑，分子式：C₃₀H₅₀O₂，溶于乙醇、乙醚、氯仿和苯，微溶于冷水、石油醚等有机溶剂。其植物主要是罗勒、青梅、桦木等的根、茎、叶、树干和树皮中，是一种重要的天然生物活性物质，具有消炎、抗病毒、抑制头发纤维中蛋白质溶解、改善受损头发光泽、促进头发生长等活性，可应用于食品、化妆品及医药等行业。桦木醇也是一种重要的药物合成中间体，如桦木醇β-桦木醇对人体黑色素瘤具有良好的抗癌效果，对前列腺癌、淋巴癌等疾病也有一定的治疗效果。在众多含有桦木醇的植物原料中，具有商业利用价值的主要是桦木树皮。但是近几年我国对桦木树皮中桦木醇的研究很少。孙宏(高效液相色谱法测定白桦树皮中儿茶素和白桦醇的含量，孙宏，张泽，化学分册，2009年第二期)报道，用色谱柱为C₁₈(150×6.0mm，5μm)，流动相为甲醇-水(75+25)混合溶液，检测波长为205nm进行含量检测。此外王遂(一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法，王遂，杨传平，姜静，刘桂丰，东北林业大学)利用高效液相色谱条件为C₁₈色谱柱，流动相中有机相为乙腈，水相为体积含量为0.1％的磷酸水溶液，进行梯度洗脱。就目前检测桦木皮中桦木醇的含量的方法中存在检测结果准确度低，操作方法繁琐，线性关系差。本发明提供的方法样品浓度与峰面积线性关系好，测定准确性高，具有良好的重现性和稳定性，适用于桦树皮中桦木醇的含量测定。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有的操作检测缺点，提供一种线性关系好，测定准确性高、具有良好的重现性和稳定性。为达上述目的，本发明采用了如下技术方案：

本发明一个具体的实施例中，本发明采用反相高效液相色谱法测定桦树皮中桦木醇的含量。

本发明又一个具体的实施例中，相色谱仪选为美国Agilent，紫外检测器，所选色谱柱为C₁₈(4.6x250mm，5μm)。

本发明再一个具体的实施例中，流动相中有机相为甲醇，水相是体积含量为0.1％的磷酸水溶液，体积比为85-75∶15-25，体积比优选80∶20。

本发明进一个具体的实施例中，所述的进样量为1-10μl，优选5μl。

本发明还一个具体的实施例中，所述流动相流速为0.5-1.5ml/mim，优选1.0ml/mim

本发明最后一个具体的实施例中，桦树皮提取液用甲醇超声提取，桦木醇采用甲醇溶解，样品浓度为1.0mg/ml。

附图说明

图1桦木醇结构式

图2桦木醇标准品液相色谱图

图3桦树皮提取液液相色谱图

图4桦木醇标准品线性关系

图5桦木醇标准品工作曲线

具体实施方式

色谱条件：

采用Agilent高效液相色谱仪，用C₁₈色谱柱C₁₈(4.6x250mm，5μm)；

柱温：25℃；

检测器：紫外检测器，检测波长210nm；

流动相溶液：甲醇-0.1％磷酸水溶液＝80∶20；

桦木醇标准溶液配制：精密称取10.0mg标准品，置于10ml容量瓶中，加甲醇超声使样品溶解并定容至刻度线。

桦树皮提取液配制：准确称取桦树皮粉末1.0g，将桦树皮粉末放在80℃烘箱中烘干，烘干的桦树皮粉末中加无水甲醇至100ml容量瓶中，超声提取50min，取上清液，用0.45μm有机滤膜过滤，即得到桦树皮提取液。

桦木醇含量计算根据公式：

W＝C×100ml/1.0g×100％

其中，C为待测样品的浓度(μg/ml)

W为桦木醇的含量

实施例1

按上述方法配制的桦木醇标准溶液，经一个0.2μm有机系针头滤器过滤后，注入1.5ml的样品瓶中，贴上标签，并放入液相色谱仪中，按本发明确定的检测方法，如下所述的色谱条件下进行测定。结果显示峰形良好，桦木醇的色谱峰与其他组分色谱峰完全分离，见图2所示。