[发明专利]一种免疫比浊法载脂蛋白E检测试剂盒

说明书

技术领域

 本发明涉及试剂盒技术领域，具体涉及一种免疫比浊法载脂蛋白E检测试剂盒。

背景技术

载脂蛋白E（ApoE）是一个含有299个氨基酸结合有磷脂的糖蛋白。其分子量为34kD。ApoE可以在各种组织中合成，但肝脏为主，首先合成的是含有317个氨基酸的前肽，这个前肽在内质网中经过蛋白水解作用除去18个氨基酸的信号肽，再经过糖基化作用和细胞外液的脱唾液酸形成成熟的ApoE；ApoE分泌入血液后转移到脂蛋白中。ApoE是脂蛋白所必须的结构蛋白，可通过与各组织细胞的受体结合，参与脂蛋白代谢，调节胆固醇水平，激活卵磷脂腿固醇脂舫蘸转移酶（LCAT），并具有某种免疫调节作用。测定ApoE对诊断和治疗高脂血症动脉粥样硬化等疾病提供了重要理论依据。

已知测定ApoE的方法有层析法、电泳法、免疫分析法、其中层析法和电泳法操作繁琐，不能进行批量样本分析和直接上全自动生化分析仪等缺点，而免疫分析法中的免疫扩散法、放射免疫分析法、荧光标记免疫分析法、酶标记免疫分析法、化学发光免疫分析法也存在诸多不足之处；如需特殊的设备，样品需处理，不能上全自动生化分析仪进行批量监测分析等。临床常用的免疫比浊法因其样本用量少，可直接在全自动生化分析仪上批量样本分析、操作简单受其欢迎；但目前建立的方法及试剂都存在一些缺点和不足，主要表现在：一是抗体效价不高，特异性、亲合力、亲和力不好；二是校准血清是以人血清为基，虽然乙肝表面抗原阴性、HIV检测阴性、丙氨酸氨基转移酶正常的人血清，但这也很难排除没有其他传染病的可能，给操作者带来不很大的危险性；而且校准血清为冻干品，每批的定值不一，使用前需用水复溶，操作极其不方便；另外，复溶后必须冰冻保存，特别是不能反复解冻使用，不但造成试剂浪费，而且质量得不到保证，测定结果差异大，其稳定性也不好；三是对高脂、黄疸、溶血样本抗干扰能力差；四是采用单点校准液定标，不符合曲线回归方程计算，导致出现高值偏低，低值偏高的现象，所测结果不准确；五是抗血清在短时间内出现沉淀，使上机操作困难，影响检测效果。

发明内容

本发明的目的是提供一种免疫比浊法载脂蛋白E检测试剂盒，它能达到操作简便、灵敏度高、特异性好、快速测定结果准确可靠的目的。

为了解决背景技术所存在的问题，本发明是采用如下技术方案：它由R1试剂、R2试剂及校准品三部分组成，R1试剂组成为PH=7.0-7.6的缓冲液40-50mmol/L、表面活性剂 70-150mmol/L、乙二胺四乙酸二钠15-30mmol/L和防腐剂1-10‰；R2试剂为在一定量的R1试剂加入体积比为30-50%的抗人载脂蛋白E抗血清；校准品为80-200g/L ApoE抗原，其还包括防腐剂0.2-15%、稳定剂1-4%、表面活性剂1-10%，上述的百分比为人血清基质体积用量的百分比。

所述的防腐剂可选用叠氮化钠、硫柳汞或苯酚中的一种或多种，本发明优选为叠氮化钠，其浓度为1-10‰。

所述的稳定剂可选用BSA或明胶，其优选BSA。

所述的表面活性剂可选用非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂或两性表面活性剂，其优选的是非离子表面活性剂Tween20。

所述的校准品为0-5mg/l牛血清基质，其还包括防腐剂0.2-2.2%、稳定剂1-6%，上述百分比为牛血清基质体积用量的百分比。

本发明的检测原理是利用抗原抗体反应，加入R1试剂接触样本中抗原周围的电子层和水化层，是抗原微点充分暴露，然后加入试剂R2使有高强度特异反应的抗ApoE抗体与样本中相应的抗原反应，形成不溶性的抗原-抗体复合物，产生一定的浊度，其浊度高低与样本中的ApoE含量成正比；在规定波长下测定该不溶性抗原-抗体的吸光度值，与已知恒定的校准液比较，则可计算出样本中ApoE的含量。

附图说明：

    图1为实施例中五种不同含量的ApoE参考标准的标准曲线示意图；

图2为分别采用本发明试剂和国外某知名公司的ApoE 的免疫比浊法试剂示意图；

图3为实施例一中操作配比示意图；

图4为实施例三中试剂最低检测限结果示意图；

图5为实施例三中A公司试剂最低检测限结果示意图；

图6为实施例四中试剂灵敏度示意图；

图7为实施例四中A公司试剂灵敏度示意图。

具体实施方式：